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[發(fā)明專利]Cr(VI)還原菌的鑒定及其培養(yǎng)方法在審

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 201710950932.6 申請日: 2017-09-30
公開(公告)號: CN109593667A 公開(公告)日: 2019-04-09
發(fā)明(設計)人: 楊宗政;張潔;劉愛霖;劉瑩;曹曉樂;江鑫;劉森;孫星;黃曄璇 申請(專利權(quán))人: 天津科技大學
主分類號: C12N1/20 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/01
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 300222 天津市河西區(qū)*** 國省代碼: 天津;12
權(quán)利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 去除 還原菌 革蘭氏陰性桿菌 微生物分離純化 鉻污染水體 蒼白桿菌 篩選分離 生理生化 實驗菌株 體積分數(shù) 細菌生長 下水管道 測序法 電鍍廠 高代謝 接種量 排污口 土壤 含鉻 細菌 篩選 修復 生長 研究
【權(quán)利要求書】:

1.Cr(VI)還原菌的鑒定及其培養(yǎng)方法,其特征在于:其步驟是:

(1)培養(yǎng)基的制備

細菌培養(yǎng)基(LB):稱取蛋白胨10g,牛肉膏5g,NaCl 5g,葡萄糖5g,少量乳酸鈉,加入1000mL蒸餾水中,用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH至7.9左右,于115℃滅菌30min,冷卻后備用(固體培養(yǎng)基加入20g/L瓊脂)。

含Cr(VI)培養(yǎng)基:實驗中以重鉻酸鉀(K2Cr2O7)作為Cr(VI)源,在已滅菌的細菌培養(yǎng)基中加入相應濃度的重鉻酸鉀(將重鉻酸鉀溶液跟液體培養(yǎng)基分別滅菌,冷卻后在超凈工作臺中將兩溶液混合在一起),調(diào)至所需濃度。

(2)菌株分離

鉻還原菌從鉻污染土壤中分離。稱取10g土壤樣品于已滅菌的250mL錐形瓶中,加入50mL滅菌培養(yǎng)基,置于恒溫搖床中,30℃、150r·min-1搖床培養(yǎng)24h,在LB液體培養(yǎng)基中逐步提高含Cr(VI)濃度,增加Cr(VI)還原菌的耐受性,用10倍稀釋法將其稀釋后涂布在固體培養(yǎng)基上進行菌株的分離篩選和培養(yǎng)。

(3)菌株篩選

通過測定菌株在不同Cr(VI)濃度下的OD600對每一株分離菌株評估它的最低抑菌濃度來測定它的耐Cr(VI)能力,抑制細菌生長的最低濃度被認為是MIC(Minimum inhibitoryconcentration)。從樣品中分離得到8株菌株能耐受150mg/L、200mg/L Cr(VI),并且培養(yǎng)液中Cr(VI)去除率可以達到50%以上。

(4)菌株鑒定

將菌株劃線接種于固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)2-3d,通過革蘭氏染色法在顯微鏡下觀察菌落形態(tài),并進行生理生化檢測。

將菌株液體培養(yǎng)24h,離心收集菌體,利用細菌基因組DNA提取試劑盒抽提基因組總DNA。使用16S rDNA通用引物27F:

5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R:

5’-GGTTACCTTGTTACGACGACTT-3’,直接擴增菌體的16S rDNA片段。PCR擴增產(chǎn)物序列送由北京六合華大基因科技有限公司進行測序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cr(VI)還原菌的鑒定及其培養(yǎng)方法,其特征在于:其培養(yǎng)條件為pH7-9、接種量6%(體積分數(shù))及30℃條件下,50mg/L的Cr(VI)在處理72h后,去除率可達89.4%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cr(VI)還原菌的鑒定及其培養(yǎng)方法,所篩選的ZJ-8菌株的16SrDNA序列具有最大同源性的菌株是Ochrobactrum tritici strain,同源性達99%。

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