[發明專利]包含柯薩奇病毒A10馴化株的病毒組合物及其應用

有效

• 申請號: 201710948996.2
• 申請日: 2017-10-12
• 公開（公告）號: CN107739731B
• 公開（公告）日: 2020-07-21
• 發明（設計）人: 史衛峰;張振杰;李娟;董兆鵬
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學（山東省醫學科學院）
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/295;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 濟南千慧專利事務所(普通合伙企業) 37232
• 代理人: 韓玉昆

本發明專利申請公開了一株高滴度、傳代穩定的柯薩奇病毒株A10馴化株TA151R?1，該病毒株能夠感染RD細胞、HEK293細胞、Vero細胞、MRC?5細胞、Hep?2細胞以及WI?38細胞等多種細胞系，還可以用于制備單價或多價疫苗，制備得到的疫苗能夠保護機體免受柯薩奇病毒的傷害，并且也能夠完全保護其他異源病毒的攻毒，可有效的預防和/或治療由柯薩奇病毒感染所致的疾病，具有廣闊的應用前景。

技術領域：

本申請涉及生物技術領域，尤其涉及包含柯薩奇病毒A10馴化株的病毒組合物及其應用。

背景技術：

手足口病(Hand,foot,and mouth disease，HFMD)是一種由小RNA病毒引起的腸道傳染性疾病，發病者主要是5歲以下嬰幼兒，主要引起粘膜皰疹、咽峽炎等輕微臨床癥狀，也能夠引起重癥，導致嚴重的無菌性腦膜炎和急性弛緩性麻痹等神經系統疾病。自2009年流行以來，柯薩奇病毒A組6型(A6)和10型(A10)在西太平洋地區和歐洲某些國家其發病率逐年升高，包括新加坡、泰國、日本、西班牙、法國和中國大陸及臺灣地區，使其成為引發HFMD的主要病原體。作為非-EV71和非-A16，A6和A10被認為是其它型腸道病毒中引起HFMD的主要病原體，并在引發HFMD的病原體中所占比例越來越大。例如，一份最近的流行病學調查報告顯示2011～2015年間重慶21615名HFMD患兒中由A6和A10所引起的比例分別為62.33％和4.79％。

目前為止，臨床治療A10重癥患兒主要采取支持療法的對癥治療，并未進行抗病毒治療，更為關鍵的是還沒有一種合適的A10疫苗預防接種兒童，另外，目前尚不明確A10的感染病理機制，獲得一株穩定高效的A10病毒株是開發疫苗以及建立動物感染模型的關鍵。本發明人在之前的工作中篩選到了A6病毒株WF057R，并利用其進行了感染動物模型的建立以及抗A6藥物的制備(CN106947745A、CN106867974A、CN106994182A)。

現在對柯薩奇病毒的研究較多，但是，關于A10病毒株的報道較少。莊再成等人在CN106661102A中公開了A10病毒株M2014，但是，該病毒株僅能感染HEK293細胞，而不能感染其他用于疫苗生產的細胞株，如，Vero細胞、MRC-5細胞、MDCK細胞以及CHO細胞，病毒力價最高只能到2.5×10⁸TCID₅₀/mL，在很大程度上限制了該病毒株的應用。我們在前期的工作中篩選得到了A10病毒株TA151R，建立了A10的乳鼠感染模型，并制備了全病毒滅活疫苗(“Protective Efficacies of Formaldehyde-Inactivated Whole-Virus Vaccine andAntivirals in a Murine Model of Coxsackievirus A10Infection”，Zhenjie Zhang等，《Journal of Virology》，2017年第91卷，e00333-17)；但是，在后續研究過程中，我們發現TA151R病毒株在傳代過程中會出現滴度降低、傳代不穩定的問題，影響了該病毒株在實際應用時的效率。

為了提高A10病毒株TA151R的滴度以及傳代穩定性，我們對該毒株進行了馴化，篩選得到一株高滴度、傳代穩定，并且能夠感染多種細胞系的馴化株TA151R-1。此外，我們利用TA151R-1與A6型病毒株WF057R分別制備了單價疫苗以及二價疫苗，制備得到的疫苗能夠保護機體免受柯薩奇病毒的傷害，并且也能夠完全保護其他異源病毒的攻毒，可有效的預防和/或治療由柯薩奇病毒感染所致的疾病。

發明內容：

本發明中所涉及的技術以及科學術語，如無特殊說明，均屬于本領域技術人員所知的常規定義。