[發明專利]一種Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法有效
| 申請號： | 201710948748.8 | 申請日： | 2017-10-12 |
| 公開（公告）號： | CN107828756B | 公開（公告）日： | 2020-11-27 |
| 發明（設計）人： | 劉放;曹庸;戴偉杰;黃早成;鄭仲沐;郭寶顏;周匆 | 申請（專利權）人： | 廣東惠爾泰生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/20 | 分類號： | C12N9/20;C12N11/08 |
| 代理公司： | 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446 | 代理人： | 鄭永泉 |
| 地址： | 510663 廣東省廣州市高新技術產業開*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 sn 專一性 固定 脂肪酶 制備 方法 | ||
1.一種Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，包括如下步驟：
S1.對大孔樹脂進行預處理去除雜質；
S2.將脂肪酶溶解于緩沖液中，離心取上層清液，即為酶液；
S3.取步驟S2得到的酶液，加入步驟S1預處理好的大孔樹脂，振揺，抽濾，洗滌，干燥，得到固定化脂肪酶；
其特征在于，所述大孔樹脂包括非極性大孔吸附樹脂LX-EP120和弱極性大孔吸附樹脂MI-WP8。
2.根據權利要求1所述的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，所述大孔樹脂中非極性大孔吸附樹脂與弱極性大孔吸附樹脂的質量比為1:1~1:2。
3.根據權利要求1所述的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，所述脂肪酶與大孔樹脂的質量比為1:0.5~1:2。
4.根據權利要求1所述的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，步驟S1中，大孔樹脂預處理包括：先后用乙醇、酸、堿浸泡去除雜質，最后水洗至中性，低溫下保存待用。
5.根據權利要求1所述的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述緩沖液為Tris－HCl、巴比妥鈉－HCl、硼酸-硼砂、檸檬酸-檸檬酸鈉、磷酸鹽緩沖液中的一種或多種，所述緩沖液的pH值為5.0~9.0。
6.根據權利要求1所述的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，步驟S3中，脂肪酶的固定化溫度為25~40℃，固定化時間為4~10h。
7.一種金屬離子溶液絡合處理制備高活力Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括如權利要求1~6任一項所述的各步驟，步驟S1中，大孔樹脂的預處理包括用含Ca2+、K+、Ba2+中一種或多種的金屬離子溶液絡合處理。
8.根據權利要求7所述的金屬離子溶液絡合處理制備高活力Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述金屬離子溶液為CaCl2、KCl、KNO3、BaCl2中的至少一種。
9.根據權利要求7或8所述的金屬離子溶液絡合處理制備高活力Sn-1,3專一性固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述金屬離子溶液的離子強度為0.02~0.05M。
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