[發(fā)明專利]一種利用兩相體系酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素提取物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710948012.0
• 申請(qǐng)日: 2017-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN107630051B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 況鵬群;王兆玲;馮尚彩;呂鑫華;趙志龍;劉祁瑞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 臨沂大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P13/00
• 分類號(hào): C12P13/00;C07C331/22
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 徐明雙

本發(fā)明公開了一種利用兩相體系酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素提取物的方法：新鮮蘿卜芽苗烘干，粉碎，正己烷提取，得除雜的蘿卜芽苗微粉；加入正己烷預(yù)分散；完成后加入磷酸鹽緩沖溶液，酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素；調(diào)節(jié)溶液pH值，靜置；加入無(wú)水硫酸鈉，脫水處理；減壓蒸餾，得還原型蘿卜硫素提取物。本發(fā)明的方法不僅可快速高得率的酶解獲得還原型蘿卜硫素提取物，而且具有高萃取率、高穩(wěn)定性的特點(diǎn)，顯著提高還原型蘿卜硫素提取物的總體制備工藝收率，大幅降低還原型蘿卜硫素的生產(chǎn)成本，避免了二氯甲烷、氯仿等高毒性有機(jī)溶劑的使用，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，特別適合工業(yè)化生產(chǎn)制備還原型蘿卜硫素提取物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用兩相體系酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素提取物的方法。

背景技術(shù)

研究表明，蘿卜具有很好的抗癌、防癌效果，長(zhǎng)期大量食用蘿卜的人群的癌癥發(fā)病率明顯低于不食用或少量食用蘿卜的人群，原因在于蘿卜中富含硫代葡萄糖苷類化合物。其能被蘿卜自身的黑芥子酶催化酶解，再經(jīng)分子內(nèi)重排，最終生成具有顯著抗癌、防癌效果的異硫氰酸酯類化合物。蘿卜中主要富含兩種硫代葡萄糖苷類化合物（氧化型蘿卜硫苷，Glucoraphenin；還原型蘿卜硫苷，Glucoraphasatin），其中，蘿卜芽苗中主要富含的硫代葡萄糖苷類化合物為還原型蘿卜硫苷，其經(jīng)蘿卜芽苗自身富含的黑芥子酶催化酶解，再經(jīng)分子內(nèi)重排反應(yīng)，最終轉(zhuǎn)化生成還原型蘿卜硫素（Raphasatin，分子式為C₆H₉NS₂）。還原型蘿卜硫素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，還原型蘿卜硫素具有很好的抗癌、防癌效果，其抗癌與防癌作用機(jī)制為：（1）顯著誘導(dǎo)Ⅱ相解毒酶的表達(dá)，促使人體快速代謝并排泄機(jī)體內(nèi)積聚的大量致癌物質(zhì)；（2）顯著誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞的快速凋亡；（3）顯著誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞增殖周期的停滯；（4）有效抑制多種癌細(xì)胞的增殖，并殺死癌細(xì)胞；（5）有效抑制幽門螺桿菌的增殖，并殺死幽門螺桿菌，從而高效預(yù)防胃癌的形成。另外，還原型蘿卜硫素還具有很好的抗氧化、抗菌、抗突變等藥理活性。

近幾年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)還原型蘿卜硫素抗癌防癌及其它藥理活性研究的不斷深入，富含還原型蘿卜硫素相關(guān)產(chǎn)品越來(lái)越受到人們的關(guān)注，對(duì)還原型蘿卜硫素提取物的需求也在不斷增加，現(xiàn)有的還原型蘿卜硫素生產(chǎn)制備方法已經(jīng)難以滿足市場(chǎng)的需求。現(xiàn)有的還原型蘿卜硫素制備方法有化學(xué)合成法和黑芥子酶酶解法。化學(xué)合成法可以大量獲得還原型蘿卜硫素，且為外消旋體，但從蘿卜芽苗中制備獲得的天然還原型蘿卜硫素為左旋體，且產(chǎn)品中高毒性的有機(jī)溶劑殘留量較高，很難滿足保健食品和藥品的要求。黑芥子酶酶解法可以從蘿卜根莖和蘿卜芽苗中制備獲得還原型蘿卜硫素，但現(xiàn)有的制備方法效率低、還原型蘿卜硫素得率低、生產(chǎn)成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。另外，現(xiàn)有的黑芥子酶酶解法需要大量的水溶液反應(yīng)體系，但還原型蘿卜硫素對(duì)水分子非常敏感，水分子可快速攻擊還原型蘿卜硫素分子中的異硫氰酸基團(tuán)，導(dǎo)致酶解生成的還原型蘿卜硫素快速降解，進(jìn)一步增加了還原型蘿卜硫素的生產(chǎn)制備難度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種高萃取率、高穩(wěn)定性的利用兩相體系酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素提取物的方法。

本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種利用兩相體系酶解與萃取偶聯(lián)制備還原型蘿卜硫素提取物的方法，是由以下步驟制得的：

1）取新鮮蘿卜芽苗，烘干，得干燥蘿卜芽苗；將干燥蘿卜芽苗粉碎，得蘿卜芽苗微粉；

本發(fā)明的烘干溫度可顯著降低新鮮蘿卜芽苗的水含量，并顯著提高蘿卜芽苗中還原型蘿卜硫素的酶解底物還原型蘿卜硫苷的保留率至96.5%以上，有效避免蘿卜芽苗干燥過(guò)程中還原型蘿卜硫苷的降解。