[發明專利]一種基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置

在審

• 申請號: 201710944615.3
• 申請日: 2017-10-12
• 公開（公告）號: CN107475078A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 陸金春
• 申請（專利權）人: 南京精競生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置，其特征在于：包括仿生裝置本體(100)，所述仿生裝置本體(100)由玻片層、硅膠管道層和聚二甲基硅氧烷層組成，所述硅膠管道層中部設有中央池(1)，所述中央池(1)外側設有入口池(2)、第一出口池(3)和第二出口池(4)，所述中央池(1)與入口池(2)、第一出口池(3)和第二出口池(4)分別通過第一管道(5)、第二管道(6)和第三管道(7)連通，所述第一管道(5)、第二管道(6)和第三管道(7)上還分別設有第一加樣口(8)、第二加樣口(9)和第三加樣口(10)。

2.根據權利要求1所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置，其特征在于：所述中央池(1)加入精子培養液；所述入口池(2)內加入精液樣本；所述第一出口池(3)和第二出口池(4)加入卵泡培養液和/或卵丘復合物；所述第一管道(5)灌裝宮頸粘液；第二管道(6)和第三管道(7)灌裝輸卵管液。

3.根據權利要求1或2所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置，其特征在于：所述中央池(1)半徑5mm，深度0.1mm；所述入口池(2)半徑為2mm，深度為6mm；所述第一出口池(3)和第二出口池(4)半徑為4mm，深度為6mm；所述第一管道(5)、第二管道(6)和第三管道(7)長10mm，寬50μm，高20μm。

4.根據權利要求2所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置，其特征在于：所述宮頸粘液來源于男性配偶、雌性動物或為人造宮頸粘液，所述人造宮頸粘液包括雞蛋清；所述精子培養液包括商用Earle’s液、BWW液；所述輸卵管液包括商用HTF液、MHTF液；所述卵泡培養液包括商用KSOM培養液、CZB培養液；所述卵丘復合物取自男性配偶或雌性動物。

5.根據權利要求2所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置，其特征在于：所述精子培養液，由以下組分組成：NaCl 0.721g，MgSO4·7H2O 0.247g，果糖1g，Na2HPO4 3.581g，KH2PO4 0.136g，純凈水1000ml。

6.根據權利要求1-5任一項所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)制作硅膠管道層的膠片式掩膜版；

(2)通過光刻膠顯影光刻得所述硅膠管道層；

(3)將聚二甲基硅氧烷前聚物與固化劑混合，充分攪拌，用真空泵將氣泡吸出，然后澆在硅膠管道層上，真空脫氣，72℃烘箱中1.5～2h固化成型，得所述聚二甲基硅氧烷層；

(4)將固化的聚二甲基硅氧烷裁剪后，用打孔器在中央池(1)、入口池(2)、第一出口池(3)、第二出口池(4)、第一加樣口(8)、第二加樣口(9)和第三加樣口(10)處打孔；

(5)用超聲清洗器清洗后，用去離子水清洗，用氮氣吹干；

(6)用等離子發生器將聚二甲基硅氧烷層與玻片層鍵合，得所述基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置。

7.根據權利要求1-6任一項所述的基于微流控技術的精子篩選與體外受精仿生裝置的工作方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)用去離子水沖洗第一管道(5)、第二管道(6)和第三管道(7)后，于60℃烘箱中烘干；

(2)用加樣器從第一加樣口(8)灌裝宮頸粘液至第一管道(5)中，灌裝總量為10nl；

(3)分別用加樣器從第二加樣口(9)和第三加樣口(10)灌裝輸卵管液至第二管道(6)和第三管道(7)中，灌裝總量為10nl；

(4)在中央池(1)中加入精子營養液10μl；

(5)在第一出口池(3)和第二出口池(4)中加入卵泡培養液和卵丘復合物，卵泡培養液加入量為350μl；

(6)在入口池(2)中加入精液樣本100μl；

(7)用密封膜封蓋仿生裝置表面，即封蓋中央池(1)、入口池(2)、第一出口池(3)、第二出口池(4)、第一加樣口(8)、第二加樣口(9)和第三加樣口(10)，然后將仿生裝置本體(100)水平置于37℃濕盒中；

(8)每10min于倒置顯微鏡下觀察一次，監測精子運行情況；精子到達第一出口池(3)和第二出口池(4)中并與卵子受精后，取出受精卵繼續培養2～3d，得受精胚。