[發明專利]一種鮮冬蟲夏草超臨界萃取物及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710943387.8
• 申請日: 2017-10-11
• 公開（公告）號: CN107693548A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 田野;李周;錢正明;李文佳;溫寶慶;肖瑛;張蓉
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司;宜昌山城水都冬蟲夏草有限公司
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61P35/00;B01D11/02
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技術領域

本發明涉及一種超臨界萃取物，具體涉及一種鮮冬蟲夏草超臨界萃取物及其該萃取物的制備方法和在制備治療肺癌藥物領域的應用。

背景技術

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的復合體，是一味傳統的名貴中藥材，與人參、鹿茸齊名并譽為中國的三大補藥。中醫認為冬蟲夏草能補肺益腎、止咳化痰，用于腎精虧虛、陽痿遺精、腰膝酸痛、久咳虛喘、癆嗽咳血(《中國藥典》2015版)。現代藥理研究表明冬蟲夏草具有降血糖、降血脂、抗炎癥、抗病毒和抗腫瘤等療效。冬蟲夏草的抗腫瘤功效近年來更是成為研究熱點，科學研究證明冬蟲夏草能夠抑制腫瘤的增殖和轉移，顯示出廣譜的抗腫瘤作用。

肺癌是威脅人類健康的主要疾病，其中非小細胞肺癌約占全部肺癌的80％，且就診時多數病人已屆晚期，化療效果較差，預后不良，已成為世界范圍內引起腫瘤患者死亡的主要原因。目前研究表明冬蟲夏草對非小細胞肺癌有抑制作用，然而現有文獻報道冬蟲夏草的抗腫瘤活性試驗都是以烘干、曬干蛹蟲草或者人工蟲草菌絲為研究原料，采用水提方式進行試驗。如文獻《北蟲草水提物對肺腺癌細胞A549的影響》報道了北蟲草水提物可抑制肺腺癌細胞A549的生長，細胞形態發生明顯變化。文獻《冬蟲夏草及人工蟲草菌絲抗小鼠Lewis肺癌的實驗研究》報道了天然蟲草及蟲草菌絲水提物對小鼠皮下移植性Lewis肺癌的生長均具有明顯抑制作用。

超臨界流體萃取技術(supercritical fluid extraction,SFE)是近年來迅速發展的被人們所知的“綠色分離”新型技術，CO₂為最常用的超臨界流體。現有文獻中關于超臨界CO₂流體萃取冬蟲夏草的研究主要是以冬蟲夏草人工發酵產物、冬蟲夏草子座、蟲草菌粉等為原料，且未對萃取物進行深入研究。如中國專利(ZL01126909.X)一種超臨界萃取蟲草油的生產方法中，以蟲草屬真菌的人工發酵物為原料，采用超臨界CO₂萃取技術獲得蟲草油。文獻《超臨界CO₂萃取冬蟲夏草子座揮發性成分的GC-MS研究》和《九州蟲草子座揮發油的超臨界CO₂流體萃取劑GC-MS分析》分別僅對冬蟲夏草子座部分和九州蟲草的揮發性成分進行了超臨界萃取。

發明內容

鮮冬蟲夏草不經高溫曬干或烘干，而是低溫冷凍干燥，能極大程度的保留其營養、有效成分，特別是揮發性成分和熱敏性的大分子活性物質。本發明將鮮冬蟲夏草經超臨界CO₂流體萃取得到的萃取物對抗腫瘤有突出作用，且活性成分明確，為提取冬蟲夏草中活性成分的研究提供新的方法和思路。

本發明目的是針對現有技術的缺陷和不足，提供一種鮮冬蟲夏草超臨界萃取物，該萃取物對非小細胞肺癌A549有明顯的抑制作用，且有效成分明確；制備過程無毒，無殘留，安全性高；操作簡便，萃取率高，易于規模化生產。

本發明的目的是通過下述技術方案實現：

一方面，本發明提供了一種鮮冬蟲夏草超臨界萃取物，其特征在于，是以鮮冬蟲夏草為原料，經超臨界CO2流體萃取而得；其中所述萃取物主要包括核苷類、脂肪酸類、甾醇類物質；其中核苷類主要包括腺苷、肌苷、鳥苷和尿苷，脂肪酸類主要包括油酸、棕櫚酸、亞油酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、十五碳酸、棕櫚油酸、十七碳酸、硬脂酸、亞麻酸和二十碳酸，甾醇類包括膽甾醇、麥角甾醇、豆甾醇和谷甾醇。

在一些實施例中，所述核苷類物質所占含量百分比為：0.0015％～0.0032％，其中肌苷:鳥苷:腺苷＝1:1.95～2.34:2.27～0.53:4.28～4.42；甾醇類物質所占含量百分比為：1％～2.53％，其中豆甾醇:谷甾醇:膽甾醇:麥角甾醇＝1:2.5～3.4:8.72～9.42:15.6～17.2；脂肪酸類物質中亞油酸、棕櫚酸、油酸三種物質的氣相色譜峰面積比例為1:0.98～1.32:2.43～2.82。