[發明專利]一種循環腫瘤細胞的液體活檢檢測方法

有效

• 申請號: 201710943050.7
• 申請日: 2017-10-11
• 公開（公告）號: CN107748256B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 賀紅;劉劍飛;洪豐
• 申請（專利權）人: 廈門驍科碼生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531;G01N21/64;G01N15/14
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

一種循環腫瘤細胞的液體活檢檢測方法，它涉及液體活檢檢測方法，該系統包括富集樣本中的循環腫瘤細胞；分離、鑒別出所述循環腫瘤細胞；單位體積內循環腫瘤細胞定量計數。本發明的智能化液體活檢方法綜合了最新的計算機科學和生物技術，開創性地發明出循環腫瘤細胞定量檢測方法、循環腫瘤細胞分離方法，以及循環腫瘤細胞體外培養方法。該方法可實現動態監測腫瘤性狀，腫瘤治療和預后評估，以及腫瘤復發監控等，因此將極大地促進中國個體化精準治療的發展。

技術領域

本發明屬于分子細胞生物學領域，具體涉及一種從人或動物生物體液中富集，鑒定，單位體積定量循環腫瘤細胞的檢測方法。

背景技術

循環腫瘤細胞和血液中循環腫瘤DNA(ctDNA)的檢測方法統稱為液體活檢。液體活檢具有快速簡便、無創性、樣本量充足、可連續性監測疾病等優點，因此成為個體化精準治療研究的一個熱點。

循環腫瘤細胞(circulating tumor cells，CTCs)是從實體腫瘤脫落入外周循環血液的具有特殊性狀的腫瘤細胞，它與腫瘤的轉移復發等有著極為密切的關系，對它的檢測有助于腫瘤的臨床進展、療效與預后評估及腫瘤復發監控，具有極其重要的臨床意義。近年來的研究對CTC的臨床意義已經有了較為清晰的認識。治療前中后不同階段CTC檢測的臨床應用及意義涵蓋了從早期診斷，輔助診斷，療效評估與預后評估，藥敏和耐藥監測，腫瘤復發監測等各個環節。

CTCs液體活檢主要包括循環腫瘤細胞的捕獲，鑒別，和后期的計數，捕獲細胞基因檢測以及捕獲活細胞培養，用藥指導。特別是動態變化的一系列某一特定病人的CTC計數，可以用來評估該病例的腫瘤負荷，在這一點上與CTC評估腫瘤的大小形成的完美的互補。也可以評估患者對治療反應，還是判斷復發的最佳或者說最敏感的指標之一。

目前，多數CTC檢測方法都是以腫瘤細胞表面的上皮細胞標志物為靶點，如上皮細胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule，EPCAM)，用相應的抗體捕獲CTC，以細胞表達CKs作為主要診斷依據，這類方法涉及的EPCAM和CKs都具有上皮細胞特異性。目前代表性檢測方法是目前唯一通過美國FDA批準進行臨床應用的CellSearch系統，該系統雖然進行了有益的嘗試，但是其計數的結果并不完全真實，有漏檢率很高的問題，受到很多的技術局限。國內cFDA批準的友芝友公司開發的設備，也有CTC計數漏檢和操作不便的問題，以葉酸檢測為鑒別標準的系統，有臨床接受度不高的問題。

近年來大量的科研與臨床實驗已證明通過去除血中的血緣性有核細胞(如白細胞等)從而達到富集提取血中的非血緣性有核細胞是最為有效的手段。雖然此手段過程中涉及的某些單一方法已經有所報道，如免疫磁珠法去除白細胞，血型糖蛋白-A(glycophorinA)交聯法去除紅細胞，以及必須借助特殊細胞分離器械的免疫磁性顆粒與密度離心結合的初步嘗試等，但這些方法耗時長，白細胞去除率低，靶細胞回收率差，且須使用特殊器材從而帶來應用的不便，而且，免疫磁珠無法完全清除白細胞。

熒光原位雜交(Fluorescence in situ Hybridization，FISH)技術用于病理組織中的腫瘤細胞檢測已被臨床廣泛的接受，有的基因異常和相關的診斷方法步驟，并成為稱作臨床分子病理診斷的金標準。比如乳腺癌胃癌當中的Her2基因拷貝擴增，肺癌中的ALK基因位置改變等。近年來，也有數項技術應用使用熒光標記的染色體著絲粒特異探針對體液中處于間期的腫瘤細胞進行染色體數目的識別(正常細胞染色體為二倍體)。找到并且計數循環腫瘤細胞。