[發(fā)明專利]突變型雙特異性抗體及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710942398.4
• 申請(qǐng)日: 2017-10-11
• 公開（公告）號(hào): CN107501412A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易吉輝;胡溪霞;李鐸;許春蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳精準(zhǔn)醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/46
• 分類號(hào): C07K16/46;C12N15/13;C12N15/864;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 生啟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種突變型雙特異性抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

淋巴瘤是起源于淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為無(wú)痛性淋巴結(jié)腫大，肝脾腫大，全身各組織器官均可受累，伴發(fā)熱、盜汗、消瘦、瘙癢等全身癥狀。淋巴瘤病因不清，一般認(rèn)為可能和基因突變以及病毒及其他病原體感染、放射線、化學(xué)藥物、合并自身免疫病等有關(guān)。

B細(xì)胞淋巴瘤是最常見的一種淋巴瘤，約占淋巴瘤的50％～60％。近年來(lái)該病在我國(guó)的發(fā)病率快速升高，嚴(yán)重危害我國(guó)人民的身體健康。目前其一線治療方案為利妥昔單抗(羅氏)與CHOP聯(lián)合治療(即R-CHOP方案)，雖然有50％以上的病人能夠在接受此治療方案后被治愈，但價(jià)格昂貴，治療費(fèi)用高達(dá)數(shù)十萬(wàn)元，我國(guó)患者難以承受。他們迫切需要一種新型的、療效顯著且價(jià)格可承受的B細(xì)胞淋巴瘤治療劑。

基因治療經(jīng)過(guò)近30年的發(fā)展，已經(jīng)由最初用于單基因遺傳性疾病的治療擴(kuò)大到6000多種疾病，包括癌癥、艾滋病、乙肝、自身免疫性疾病和代謝性疾病等。2012年荷蘭UniQure公司的Glybera作為全球首個(gè)基因治療藥物被批準(zhǔn)上市，正式開啟了基因治療的新里程。

雙特異性抗體是指含有兩種特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)的人工抗體，是近年來(lái)備受矚目的臨床應(yīng)用新型抗體。其主要分為2類:含有Fc區(qū)的雙特異性抗體和不含F(xiàn)c區(qū)的雙特異性抗體。包含F(xiàn)c區(qū)能保障抗體的穩(wěn)定性，在體內(nèi)維持較長(zhǎng)時(shí)間的藥效濃度，但生產(chǎn)純化困難，分子量大、組織滲透性不理想。不包含F(xiàn)c區(qū)的雙特異性抗體生產(chǎn)純化工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，且因其分子量小、更易滲透到組織細(xì)胞中發(fā)揮功能，但其半衰期短是一大劣勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種既能便于生產(chǎn)、易滲透到腫瘤組織中又能與抗原具有較強(qiáng)結(jié)合能力的突變型雙特異性抗體及其應(yīng)用。

一種突變型雙特異性抗體，包括依次連接的anti-CD20VL突變體、第一連接肽、anti-CD20VH突變體、第二連接肽、anti-CD3VH突變體、第三連接肽以及anti-CD3VL突變體；

其中，所述anti-CD20VL突變體包括由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列組成的多肽，所述anti-CD20VH突變體包括由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列組成的多肽，所述anti-CD3VH突變體包括由SEQ ID No.3所示的氨基酸序列組成的多肽，所述anti-CD3VL突變體包括由SEQ ID No.4所示的氨基酸序列組成的多肽，所述突變型雙特異性抗體為單鏈抗體。

該突變型雙特異性抗體(BsAb)包括依次連接的anti-CD20VL突變體、第一連接肽、anti-CD20VH突變體、第二連接肽、anti-CD3VH突變體、第三連接肽以及anti-CD3VL突變體。其中，anti-CD20VL突變體以及anti-CD20VH突變體分別由抗CD20單克隆抗體的VL(輕鏈)區(qū)域和VH(重鏈)區(qū)域進(jìn)行部分氨基酸突變得到。anti-CD3VH突變體和anti-CD3VL突變體分別由抗CD3單克隆抗體的VH(重鏈)區(qū)域和VL(輕鏈)區(qū)域進(jìn)行部分氨基酸突變得到。該突變型雙特異性抗體的抗體區(qū)域由CD20抗體及CD3抗體的VL區(qū)域和VH區(qū)域形成，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，滲透到腫瘤組織中的能力較強(qiáng)。且anti-CD20VL及VH功能區(qū)突變后，獲得的anti-CD20VL突變體及anti-CD20VH突變體以第一連接肽連接，能折疊形成特異性識(shí)別CD20分子的抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)。anti-CD3VL及VH功能區(qū)突變后，獲得的anti-CD3VH突變體及anti-CD3VL突變體以第三連接肽連接，能折疊形成特異性識(shí)別CD3分子的抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)。整個(gè)突變型雙特異性抗體各個(gè)功能區(qū)域依次連接形成單鏈狀，通過(guò)共價(jià)鍵等分子間作用力形成N端特異性識(shí)別CD20分子、C端特異性識(shí)別CD3分子的兩個(gè)完整抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)，與相應(yīng)的抗原的結(jié)合能力較強(qiáng)。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述突變型雙特異性抗體還包括Flag標(biāo)簽蛋白和His標(biāo)簽蛋白，所述Flag標(biāo)簽蛋白標(biāo)記在所述anti-CD20VL突變體的N端，所述His標(biāo)簽蛋標(biāo)記在所述anti-CD3VL突變體的C端。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述突變型雙特異性抗體包括:(a)由SEQ ID No.5所示的氨基酸序列組成的多肽，(b)、與SEQ ID No.5所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少98％同源性且具有所述突變型雙特異性抗體活性的多肽，或(c)、由SEQ ID No.5所示的氨基酸序列組成的多肽，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸被缺失、替代或增加得到且具有所述突變型雙特異性抗體活性的多肽。