[發(fā)明專利]用于金黃色葡萄球菌Staphopain B蛋白檢測的B細(xì)胞抗原表位肽及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710941436.4
• 申請日: 2017-10-11
• 公開（公告）號: CN107827961B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧啟文;胡凱濤;鄭金鑫;陳重;涂浩鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市南山區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;C07K14/795;G01N33/569
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 覃迎峰

本發(fā)明提供了一種用于金黃色葡萄球菌Staphopain B蛋白檢測的B細(xì)胞抗原表位肽及其試劑盒，所述的B細(xì)胞抗原表位肽的核心氨基酸序列為：SVSQNPNDPHLG、ATKNTDTYNA或PWDTELSIQDADS。本發(fā)明的技術(shù)方案的B細(xì)胞抗原表位肽，用于金黃色葡萄球菌Staphopain B蛋白檢測，具有良好的免疫原性，且具有良好的SA特異性，可作為篩選患者血清的診斷試劑，其能用于血流S.aureus感染的早期診斷，具有很大的臨床價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗原表位肽，尤其涉及一種用于金黃色葡萄球菌Staphopain B蛋白檢測的B細(xì)胞抗原表位肽及其試劑盒。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是臨床分離的重要致病菌和定植菌之一，可導(dǎo)致大量的嚴(yán)重的、甚至危及生命的感染性疾病。2008-2015年Mohnarin資料顯示，綜合醫(yī)院耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)分離株占S.aureus67.6％、ICU中高達(dá)84.8％；S.aureus居肺部感染G+球菌第一位，其中MRSA分離率26.3％；醫(yī)院的敗血癥血培養(yǎng)陽性結(jié)果中S.aureus約占3-5％。而S.aureus泛耐藥株的出現(xiàn)，大大增加了S.aureus菌感染治療的難度，增加患者住院的時間。約5-10％的住院患者會產(chǎn)生院內(nèi)感染，醫(yī)院的病人越多，則感染的幾率越大。MRSA是導(dǎo)致院內(nèi)感染的常見病原菌。MRSA對大多數(shù)抗生素耐藥的特性，給感染的治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)，特別是對糖肽類抗生素中介耐藥的S.aureus的出現(xiàn)。MRSA感染成為了一個全球性的問題。世界各地區(qū)均有一些MRSA感染的大型疫情的報告。MRSA已經(jīng)造成了包括敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等嚴(yán)重的感染。MRSA引起的感染因其抗生素的治療、隔離設(shè)施和材料和住院時間的延長而花費(fèi)巨大，快速篩查S.aureus攜帶狀況和檢測致病菌是預(yù)防S.aureus感染及時治療的關(guān)鍵。

S.aureus在自然環(huán)境中普遍存在，多定植于人的腹股溝、腋下、鼻腔及會陰部。葡萄球菌感染可導(dǎo)致膿腫(葡萄球菌和白細(xì)胞)。S.aureus能夠產(chǎn)生蛋白水解酶(如lytm和staphopain B等)，促進(jìn)了膿腫擴(kuò)散過程。葡萄球菌感染可導(dǎo)致肺炎、心內(nèi)膜炎、骨髓炎和關(guān)節(jié)腔感染等。約25％～35％免疫缺陷患者(如腫瘤、使用免疫抑制劑、AIDS等)會發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥(甚至敗血癥)。半胱氨酸蛋白酶Staphopain B是已知的金葡致病蛋白，且在金葡菌中的表達(dá)豐富，在體外，Staphopain B將LL-37降解成較短的肽片段，LL-37顯著抑制金黃色葡萄球菌的生物膜形成，而降解產(chǎn)物沒有觀察到這樣的作用。Staphopain B是葡萄球菌蛋白酶激活級聯(lián)中的最終酶，小鼠模型中，staphopain B敲除菌株的毒力減弱。另外，Staphopain B能破壞結(jié)締組織，造成凝血和激肽系統(tǒng)的紊亂，同時能直接與宿主免疫細(xì)胞作用，在金黃色葡萄球菌的存活和/或致病性中具重要性。

對于金葡感染的檢測手段，傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測方法主要有選擇性增菌培養(yǎng)和生化鑒定，如免疫膠乳凝膠試驗(yàn)、耐熱核酸酶試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)，其缺點(diǎn)在于耗時長、操作繁瑣復(fù)雜。此外，血流感染方面，基于培養(yǎng)的方法還有其缺點(diǎn)主要在于血培養(yǎng)的陽性率較低(20％-25％)，且培養(yǎng)過長同樣耗時過長。因此，脫離培養(yǎng)，直接或者間接性檢測“生物標(biāo)志物”也是早期診斷開發(fā)研究的重要方向。如分子雜交(FISH)、QPCR等分子標(biāo)志物靶向方法，盡管可以做到直接檢測金葡的分子標(biāo)志物，但成本高，如QPCR，大約100元/樣本，且存在污染的可能性較高且操作同樣繁瑣等缺點(diǎn)限制了其臨床廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種用于金黃色葡萄球菌Staphopain B蛋白檢測的B細(xì)胞抗原表位肽及其試劑盒，結(jié)合酶聯(lián)免疫分析法，可用于血流S.aureus感染的早期診斷。

對此，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：