[發明專利]刺葡萄轉錄因子VdWRKY70及其在培育植物抗性品種中的應用

在審

• 申請號: 201710934742.5
• 申請日: 2017-10-10
• 公開（公告）號: CN107501399A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 張穎;賈云飛;劉崇懷;樊秀彩;姜建福
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司41111
• 代理人: 陳勇

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體涉及刺葡萄轉錄因子VdWRKY70及其在培育植物抗性品種中的應用。

背景技術

植物在生長發育過程中常受到真菌、細菌、病毒、支原體、線蟲等生物脅迫，表現為抗病或感病。植物免疫系統由兩個免疫反應組成：病原相關分子模式激發的免疫反應（PAMP-triggered immunity，PTI）和效應蛋白激發的免疫反應（Effector triggered immunity，ETI）。PTI和ETI都屬于系統獲得性抗性（systemic acquired resistance，SAR），SAR是SA介導的植物對病原菌的抗病反應，WRKY轉錄因子是SA信號傳遞過程中的重要轉錄因子，在調控與植物防御反應相關基因的表達上起著非常重要的作用。

葡萄是我國栽培最廣泛的水果之一，葡萄病害隨著葡萄產業的發展越發嚴重，白腐病是由真菌（Coniothyrium diplodiella）引起的，是葡萄最嚴重的四大病害之一。白腐病對葡萄的危害包括減弱樹勢、破壞枝蔓、減產甚至引起絕收，嚴重威脅葡萄的生產。刺葡萄是葡萄科葡萄屬東亞種群的一種野生種質資源，其對黑痘病、白腐病、炭疽病等具有很強的抗性已成為葡萄耐濕熱、抗病育種的寶貴資源。利用現代分子生物技術手段從我國特有的種質資源中尋找抗性基因、鑒定抗性品種，是葡萄產業化生產和我國優異資源保護的迫切需要。

葡萄全基因組中屬于WRKY家族有80個成員，VdWRKY70的CDS序列931bp，屬于典型的WRKY轉錄因子第Ⅲ家族成員。一個或少數幾個轉錄因子可以調控一系列下游抗病防御反應基因的表達，有可能通過導入或改良轉錄因子的基因工程方法來綜合改良植物抗病性狀。因此，探尋在刺葡萄抗病防御反應中具有正調控作用的轉錄因子基因對鑒定抗病轉基因刺葡萄新品種有著非常重要的意義。

發明內容

本發明目的是提供刺葡萄轉錄因子VdWRKY70及其在培育植物抗性品種中的應用，通過實時熒光定量PCR技術，發現轉基因型擬南芥對Pst DC3000有一定地抗性，可以培育出擬南芥抗Pst DC3000品種，同時也為深入了解轉錄因子VdWRKY70在刺葡萄體內的生化特征及生理功能奠定基礎。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供一種刺葡萄轉錄因子VdWRKY70，所述刺葡萄轉錄因子VdWRKY70的編碼核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，其長度為931bp。

本發明還提供一種刺葡萄轉錄因子VdWRKY70在培育植物抗性品種中的應用。

進一步地，所述植物抗性品種為植物抗PstDC3000品種。

進一步地，所述植物抗性品種為擬南芥抗Pst DC3000品種。

進一步地，培育擬南芥抗Pst DC3000品種的方法如下：應用農業生物技術方法，將刺葡萄轉錄因子VdWRKY70轉化入擬南芥細胞，得到表達VdWRKY70的轉基因型擬南芥，在表達VdWRKY70的轉基因型擬南芥上接種PstDC3000，幾天后，采用實時熒光定量PCR技術分析轉錄因子VdWRKY70基因的相對表達量，對比野生型擬南芥，相對表達量較高的為擬南芥抗Pst DC3000品種。

進一步地，所述實時熒光定量PCR技術中采用的引物如下：

上游引物VdWRKY70-F：5’-ATGGCAACCAAACAGGTCCAGAT-3’；

下游引物VdWRKY70-R：5’-GGCGTTGCTATCATCTTGATTGTTT-3’。

進一步地，所述實時熒光定量PCR技術中采用的內參基因如下：

Atactin-F：GAAATCACAGCACTTGCACC；

Atactin-R：AAGCCTTTGATCTTGAGAGC。

相比現有技術，本發明的有益效果在于：