[發明專利]一種汞污染海水的生物處理方法

有效

• 申請號: 201710931791.3
• 申請日: 2017-10-09
• 公開（公告）號: CN107828676B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 郭遠明;李鐵軍;楊承虎;胡紅美;李子孟;祝銀
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/14;C12N11/08;C02F3/34;C02F101/20;C02F103/08;C12R1/07;C12R1/67;C12R1/72
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）分離微生物：利用涂布及畫線分離方法分離得到所需的微生物；

（2）微生物的培養：將步驟（1）中分離得到的微生物接種到培養基中，然后進行培養，將菌株進行活化后，選取單菌落取出，接種到新培養基中進行培養，將新培養基中的菌制備為菌液；所述微生物為芽孢桿菌（Bacillus）和鏈狀假絲酵母（Candida catenulata），所述芽孢桿菌和鏈狀假絲酵母的加入的數量比為4∶5~5∶6；所述芽孢桿菌和鏈狀假絲酵母在培養過程中菌株均活化兩次；

（3）重金屬污染修復：將步驟（2）中得到的菌液加入重金屬污染海水中，進行重金屬污染的修復；

將步驟（2）中的鏈狀假絲酵母菌液和芽孢桿菌菌液混合后，得混合菌液；將載體加入到所述的混合菌液中，加入3~5重量份安息香二甲醚，4~5重量份四甲基乙二胺，2~3重量份過硫酸鉀，快速攪拌均勻，進行固化，靜置3~4h，而后在輻射光源下輻照1~2min，隨后固化后的包埋菌取出代替菌液對海水實施重金屬污染修復；

所述載體采用以下方法制備：在75~80℃的水中加入10~15重量份的聚乙烯醇，攪拌至溶解，待溶液冷卻后再加入20~30重量份的丙烯酰胺，然后加入3~5重量份的質量分數為4~8%的氯化鈣溶液，攪拌至溶解，然后加入聚丁二酸丁二醇酯緩沖液至其為中性。

2.根據權利要求1所述的一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于，所述的芽孢桿菌采用以下方法培養：將標準菌株接種LB固體培養基，分別置于25~28°C培養箱中培養24~48h，然后將菌株連續活化兩次后，挑取在LB固體培養基平板上生長出的單菌落，接種到LB液體培養基中，在15~28 °C，在轉速為130~160 rpm搖床振蕩培養24-48h，離心收集菌體，重懸，并調整芽孢桿菌菌液濃度使得芽孢桿菌菌液的OD600在0.8~1.0。

3.根據權利要求1所述的一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于，所述鏈狀假絲酵母采用以下方法培養：將標準菌株接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，培養箱中培養18~24h，保持培養溫度25℃~28℃，菌株連續活化兩次后，接種在馬鈴薯葡萄糖液體培養基上，保持培養溫度25℃~28℃，在轉速為120~160rpm搖床上培養18-24h，離心收集菌體，重懸，并調整鏈狀假絲酵母菌液濃度使得鏈狀假絲酵母菌液的OD600在0.8~1.0。

4.根據權利要求2所述的一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于，所述的LB液體培養基包括以下重量份的原料：酵母膏5~6重量份，氯化鈉10~12重量份，蛋白胨10~12重量份；

所述的LB固體培養基包括以下重量份的原料：酵母膏5~6重量份，氯化鈉10~12重量份，蛋白胨10~12重量份，瓊脂粉1~2重量份。

5.根據權利要求3所述的一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于：所述的馬鈴薯葡萄糖培養基包括以下重量份的組分：馬鈴薯粉5~6重量份，葡萄糖18~20重量份，瓊脂粉2~3重量份。

6.根據權利要求3所述的一種汞污染海水的生物處理方法，其特征在于：所述的馬鈴薯葡萄糖培養基、LB固體培養基和所述的LB液體培養基在制備完成后均經過滅菌處理，所述的滅菌處理采用高溫蒸汽滅菌的方法，所述的LB固體培養基和所述的LB液體培養基在121~126°C蒸汽加熱下滅菌30~40min，所述的馬鈴薯葡萄糖培養基在115~120°C蒸汽加熱下滅菌25~30min。