[發明專利]一種苗期快速鑒定啤酒花植株雌雄性別的方法

有效

• 申請號: 201710927941.3
• 申請日: 2017-10-09
• 公開（公告）號: CN107505303B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 陳春麗;張露怡;余昌秀
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明涉及細胞遺傳學領域，具體涉及一種苗期快速鑒定啤酒花植株雌雄性別的方法，通過制備染色體玻片標本、CMA/DAPI染色、熒光檢測、圖像分析等步驟，重點解決了現有鑒別啤酒花雌雄株鑒定時期晚、復雜繁瑣的分子生物學方法，提供一種簡便、快捷、準確的方法。本發明提供的方法與單熒光染色發相比可以更好地顯示啤酒花染色體的結構，特別是雌株和雄株的染色體核仁組織區形態結構。

技術領域

本發明涉及細胞遺傳學領域。具體地說，本發明涉及一種苗期快速鑒定啤酒花植株雌雄性別的方法。

背景技術

啤酒花，學名Humulus lupulus L.，別名蛇麻草、陀得花等，是蕁麻目大麻科葎草屬,多年生藤蔓草本植物，莖、枝和葉柄密生絨毛和倒鉤刺。啤酒花雌雄異株，雌花穗狀，雄花圓錐花序，釀造所用均為雌花。啤酒花在世界許多地區均可生長，大部分種植區域集中在南北緯度35°～55°之間。目前，其主要產地分布在美國，歐洲、澳大利亞、南美洲和中國等地區。在啤酒釀造中添加啤酒花可賦予啤酒清爽的苦味和芬芳的香味，并具有防腐和澄清麥芽汁的功能。因此啤酒花被譽為“啤酒的靈魂”，自12世紀以來，至今它最主要的用途仍然是用于啤酒的釀造。

啤酒花作為一種重要的藥用植物，它的應用歷史也十分悠久。13世紀開始，啤酒花就開始作為草藥來使用。我國明代李時珍的《本草綱目》所引的宋代《開寶本草》中的一種中藥“陀得花”指的就是啤酒花。近年來的研究表明，啤酒花不僅具有鎮定、安神、健胃、殺菌、抗炎和利尿等作用，還具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤和植物雌激素樣作用等多種功效。

基于染料的常用染色體顯帶技術(chromosome banding technique)有N帶、C帶、G帶、R帶等，可以顯示出染色體的基本形態特征如大小、主次縊痕。這些方法能反映出一定的生物學意義，在生物學研究中發揮了很大的作用，如植物進化生物學，人類和哺乳動物染色體研究。隨著熒光染料的發現，熒光顯帶技術在核型分析中的應用日漸廣泛。染色體熒光顯帶是利用熒光染料對染色體進行染色分帶，原理是利用熒光染料與堿基對的特異性結合。常見的核酸熒光染料主要有CMA(色霉素A3)、DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚)、PI(碘化丙啶)等。其中CMA為GC特異型熒光染料，DAPI為AT特異型熒光染料。

染色體制片及雙熒光染色具體方法因物種而異。不同的植物需要不同的對氯二苯的處理時間、溫度，以及不同的根尖酶解時間等。這些因素都會影響最終的染色體形態結構及染色效果。例如：不同的對氯二苯處理時間和溫度會使染色體的濃縮程度不同。如果根尖酶解時間過久，則在熒光顯微鏡下很有可能觀察不到染色體。酶解時間不夠，則細胞壁仍存在，染色體分散不開，不利于染色體結構觀察。染色體雙熒光染色的染料選擇以及染色次序、染色時間對最終染色體形態結構的細節呈現都非常關鍵。單一的熒光染料常常不能顯示染色體的整體結構。CMA與DAPI這兩種熒光染料正好可以互補。但CMA染色在實際操作中存在一定難度，染色時間過短不利于染色體著色，染色時間過長顯示不出染色體的細節結構。而且與DAPI的染色次序也很重要，因為DAPI著色往往較快，容易覆蓋CMA的熒光。本專利提供了啤酒花根尖染色體制片及雙熒光染色的具體方案。

在生產種植中，人們只栽培經濟效益大的雌性啤酒花。簡單、快速的CMA/DAPI染色體雙熒光染色法的應用可以在啤酒花苗期鑒定其性別，指導它的生產，對啤酒花經濟產鏈的發展有重大意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種苗期快速鑒定啤酒花植株雌雄性別的方法，方法簡單，染色效果好，能對啤酒花的雄雌做快速準確的判斷。

為實現上述目的，本發明公開了如下的技術內容：

一種苗期快速鑒定啤酒花植株雌雄性別的方法，包括下述步驟：

染色體標本制作：

(1)啤酒花植株根尖長至2-3cm，且頂端圓潤飽滿；

(2)切下生長旺盛的根尖2.5-3mm，用飽和對二氯苯溶液4℃下處理20-24h；