[發(fā)明專利]一種鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710925510.3
• 申請(qǐng)日: 2017-10-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107714681A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊豪偉;張思靜;胡戈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京普氟生物檢測(cè)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61K31/138
• 分類號(hào): A61K31/138;A61K47/32;A61P43/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，涉及已知化合物的新用途，具體涉及一種鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的用途。

背景技術(shù)

鹽酸沙格雷酯片1993年在日本首次上市，商品名為Anplag，是一種5-HT2受體阻滯劑，能夠抑制血小板凝聚、抑制血管收縮，具有抗血栓作用以及改善微循環(huán)。其適應(yīng)癥為改善慢性動(dòng)脈閉塞癥引起的潰瘍、疼痛以及冷感等缺血性諸癥狀。

鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ是鹽酸沙格雷酯的一種光降解雜質(zhì)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

現(xiàn)有技術(shù)中，鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ主要用于鹽酸沙格雷酯原料及制劑的質(zhì)量控制，沒(méi)有關(guān)于其藥理活性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的用途。

本發(fā)明通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ在制備用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的藥物中的應(yīng)用。

一種用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的藥物制劑，含有上述鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ。

優(yōu)選地，所述藥物制劑還含有藥學(xué)上可以接受的載體或賦形劑制成藥學(xué)上可接受的劑型。

優(yōu)選地，所述劑型為固體分散體，所述載體或賦形劑為聚維酮K-30。

優(yōu)選地，所述鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ與聚維酮K-30的質(zhì)量比為1:(4.5-5.5)。

上述藥物制劑的制備方法：將鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ和聚維酮K-30按質(zhì)量比溶于無(wú)水乙醇中配置成所需濃度的溶液，常溫?cái)嚢瑁瑴p壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥，粉碎即得固體分散體。

優(yōu)選地，常溫?cái)嚢?-5h后45-55℃條件下減壓蒸發(fā)除去溶劑，真空干燥后粉碎過(guò)5號(hào)篩。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供了鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ在制備用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的藥物中的應(yīng)用，鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ可以用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化，這突破了現(xiàn)有技術(shù)對(duì)鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ的認(rèn)知水平；為了克服鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ水溶性較差生物利用度低的問(wèn)題，本發(fā)明提供了鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ-聚維酮K-30固體分散體，該制劑可以顯著提高鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ的水溶性，進(jìn)而提高其生物利用度。

附圖說(shuō)明

圖1為鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ誘導(dǎo)BMSCs成骨早期鈣鹽沉積檢測(cè)結(jié)果；

圖2為鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ誘導(dǎo)BMSCs成骨早期成骨相關(guān)蛋白COLⅠ表達(dá)檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步介紹本發(fā)明的技術(shù)方案。

實(shí)施例1鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨分化作用

一、實(shí)驗(yàn)材料

低糖DMEM培養(yǎng)基(Gibco，USA)，胎牛血清(Gibco，USA)，0.25％胰蛋白酶(含0.02％EDTA，Gibco，USA)，茜素紅S(Sigma，USA)，羊COLⅠ多克隆抗體(Santa Cruz，USA)。鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ自制，HPLC歸一化純度大于98％。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1、BMSCs分離和培養(yǎng)

取3周齡并且身體健康的SD大鼠2只，體重約100g，不限雌雄，給予過(guò)量10％水合氯醛進(jìn)行腹腔注射致死，75％酒精浸泡消毒10min，在無(wú)菌條件下將大鼠雙側(cè)的脛骨及股骨取出，并將附著組織清除干凈，清除關(guān)節(jié)處軟骨組織及兩側(cè)骨端時(shí)，注意保持關(guān)節(jié)的完整。注射器抽取5mLDMEM完全培養(yǎng)基(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素，100U/mL鏈霉素)，自一端開(kāi)始沖洗，骨髓腔反復(fù)沖洗干凈后，將其制成分散充分的骨髓細(xì)胞懸液，并接種在25cm²塑料瓶中于37℃、5％CO₂進(jìn)行培養(yǎng)，48h后首次全培養(yǎng)液換液，換液前用PBS輕輕沖洗未貼壁細(xì)胞。然后每隔2-3d換液一次，待細(xì)胞達(dá)到90％融合時(shí)，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。

2、鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ干預(yù)液的配制

精密稱取鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ適量，用DMSO溶解配制成母液，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌后于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3、BMSCs的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)

取體外擴(kuò)增的第三代細(xì)胞，以1×10⁵個(gè)/孔的種植密度接種到6孔培養(yǎng)板中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，24h后依據(jù)分組情況選用不同培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)72h，分組情況為：

對(duì)照組：DMEM完全培養(yǎng)基；

低濃度干預(yù)組：DMEM完全培養(yǎng)基+5μM鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ；

中濃度干預(yù)組：DMEM完全培養(yǎng)基+10μM鹽酸沙格雷酯雜質(zhì)Ⅰ；