[發明專利]一種鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ用于增強CIK細胞活性的用途

在審

• 申請號: 201710925273.0
• 申請日: 2017-10-03
• 公開（公告）號: CN107595831A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 楊豪偉;張思靜;王斌
• 申請（專利權）人: 南京普氟生物檢測技術有限公司
• 主分類號: A61K31/225
• 分類號: A61K31/225;A61K47/32;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于藥物領域，涉及已知化合物的新用途，具體涉及一種鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ用于增強CIK細胞活性的用途。

背景技術

鹽酸沙格雷酯片1993年在日本首次上市，商品名為Anplag，是一種5-HT2受體阻滯劑，能夠抑制血小板凝聚、抑制血管收縮，具有抗血栓作用以及改善微循環。其適應癥為改善慢性動脈閉塞癥引起的潰瘍、疼痛以及冷感等缺血性諸癥狀。

鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ是鹽酸沙格雷酯的一種光降解雜質，其化學結構式如下：

現有技術中，鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ主要用于鹽酸沙格雷酯原料及制劑的質量控制，沒有關于其藥理活性的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ用于增強CIK細胞活性的用途。

本發明通過下面的技術方案得以實現：

鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ用于制備增強CIK細胞增殖活性和殺瘤活性的藥物的用途。

一種用于增強CIK細胞增殖活性和殺瘤活性的藥物制劑，含有上述鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ。

優選地，還含有藥學上可以接受的載體或賦形劑制成藥學上可以接受的劑型。

優選地，所述載體或賦形劑為PVP K-90。

PVP K-90在增強鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ熱穩定性方面的應用。

本發明的優點：

本發明提供了鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ用于制備增強CIK細胞增殖活性和殺瘤活性的藥物的用途，鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ可以用于增強CIK細胞的增殖能力和對腫瘤細胞的殺傷能力，這突破了現有技術對鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ的認知水平；本發明還提供了一種鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ的藥物制劑，該制劑中至少含有PVP K-90，PVP K-90可以用于提高鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ的熱穩定性，抑制其在高溫條件下的降解水平。

附圖說明

圖1為不同濃度鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ對CIK細胞增殖的影響(OD450值比較)；

圖2為鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ對CIK細胞體內外殺瘤活性的影響。

具體實施方式

下面結合具體實施例進一步介紹本發明的技術方案。

實施例1鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ增強CIK細胞增殖活性和殺瘤活性

一、實驗材料

DMEM、RPMI-1640和GT-T551培養液，以及胎牛血清均為美國Gibco公司產品。青霉素-鏈霉素溶液產自碧云天。淋巴細胞分離自健康志愿者外周血。SMMC-7721肝癌細胞系于上海中科院購買，本實驗室長期保存。鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ自制，HPLC歸一化純度大于98％。

二、實驗方法

1、CIK細胞分離及原代培養

采集健康志愿者血液20mL，平衡溫度至室溫。取50mL離心管若干，將血樣轉移至離心管，用生理鹽水稀釋至30mL，充分吹打均勻。將稀釋后的血樣緩緩加入另一管裝有15mL淋巴細胞分離液的上方，形成上下兩相。22℃，390g離心30min。離心后血漿層與分離液之間有白膜層可見，分別收集上層血漿和中間白膜層至新的離心管。于收集白膜層的離心管中加入RPMI-1640至45mL，混勻，22℃，1000g離心10min。重復上一步驟兩次，離心速度分別改為400g和201g，最后一次離心之前取20μL混勻的細胞懸液進行臺盼藍染色計數。離心后重懸細胞，按細胞數5×10⁶個/mL加含有500μg/L CD3mAB，1000U/mL IL-2和10％FBS的GT-T551培養基誘導培養成CIK細胞。

2、腫瘤細胞培養

在37℃，5％CO₂及90％相對濕度的細胞培養箱中用DMEM完全培養液(含10％胎牛血清和100mg/L青-鏈霉素溶液)培養SMMC-7721細胞。

3、CCK-8檢測細胞增殖活力

將培養7d的CIK細胞數調整至3×10⁵個/mL，于96孔平底細胞培養板每孔加入細胞懸液50μL，設干預組和對照組，對照組為生理鹽水組，干預組分為低、中、高濃度組，分別加入鹽酸沙格雷酯雜質Ⅲ終濃度為5、10、20μM的培養基各50μL，每個濃度4個平行對照孔，置于細胞培養箱中處理細胞72h，加入10μL CCK-8溶液，4h后用酶聯免疫檢測儀檢測OD450值，測定低、中、高濃度干預組OD450值。

4、腫瘤殺傷實驗