[發(fā)明專利]一種蛋白芯片檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710924969.1
• 申請日: 2017-10-02
• 公開（公告）號: CN107561258A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張慶華;宋凱;李文娜
• 申請（專利權(quán)）人: 上海華盈生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蛋白芯片檢測試劑盒。

背景技術(shù)

蛋白芯片是一種高通量的檢測技術(shù)，是近年發(fā)展起來的生物檢測技術(shù)。利用這項技術(shù)，通過將大量抗體密集地點制在固相載體上，可同時檢測多種蛋白質(zhì)的量變。該技術(shù)效率高且樣本需求量小。蛋白芯片檢測技術(shù)流程中較為重要的一步就是樣品與芯片的雜交反應(yīng)，其對蛋白芯片的檢測結(jié)果影響重大，主要體現(xiàn)在芯片背景、信號檢出率、信號強度、信號均一性等方面。

目前，國內(nèi)外蛋白芯片公司大多擁有適用于本公司生產(chǎn)的蛋白芯片的專門的檢測試劑盒，但其試劑盒具有價格高昂、成分不公開、不適合其他類型的表面化學(xué)修飾片基制備的蛋白芯片的檢測，具體表現(xiàn)為檢測信號低等缺點。而傳統(tǒng)的芯片雜交試劑，比如包含不同比例的吐溫、脫脂奶粉或BSA的雜交緩沖液則具有芯片背景高和信號檢出率低等缺點。因此，開發(fā)一種檢出信號強的、成本低的、適用性廣的蛋白芯片檢測試劑盒是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種蛋白芯片檢測試劑盒，具有操作簡便、信號強度高、信號檢出率高、背景低、適用于多種片基等優(yōu)點。能夠彌補現(xiàn)有蛋白芯片檢測試劑檢測信號低、適用的片基類型少等不足之處，滿足蛋白芯片檢測需要，對蛋白芯片的發(fā)展和推廣具有重要價值。

為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種蛋白芯片檢測試劑盒，由以下組分組成：

A、雜交液：10-50mM氯化鈉，100-500mM甘氨酸，1-10mM磷酸二氫鉀，1-10mM磷酸氫二鈉，10-200mM蔗糖，1-30mM乙二胺四乙酸，0.01-2％吐溫-20；

B、封閉液：50-200mM磷酸鹽緩沖液，0.01-2％吐溫-20；

C、清洗液：50-200mM磷酸鹽緩沖液，0.01-2％吐溫-20；

D、脫脂奶粉。

以上雜交液A和封閉液B在使用前需加入1-10％脫脂奶粉。以上雜交液、封閉液和清洗液pH為5.0-9.0。

本發(fā)明提供的蛋白芯片檢測試劑盒適用于直接標(biāo)記待測物的方法或者雙抗夾心法(先用待測物與芯片雜交，再用標(biāo)記的二抗與芯片雜交)等各種方法檢測蛋白芯片。具有簡便快速、信號檢出強、信號檢出率高、背景低、成本低、適用于多種片基的特點，在蛋白芯片檢測方面具有顯著優(yōu)勢。

具體實施方式

下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規(guī)條件，如《精編分子生物學(xué)實驗指南》(F.M.奧斯伯,R.E.金斯頓,J.G.塞德曼等主編，馬學(xué)軍，舒躍龍等譯校。北京：科學(xué)出版社，2004)中所述的方法進行，或按照執(zhí)照廠商建議的條件進行。

實施例1蛋白芯片檢測試劑盒制備過程

A、雜交液：0.75g氯化鈉，30g甘氨酸，0.23g磷酸二氫鉀，0.47g磷酸氫二鈉，10.00g蔗糖，10ml 2％的乙二胺四乙酸，500ul吐溫-20，加去離子水定容至1000ml，調(diào)節(jié)pH至7.0，使用前取適量加入3％脫脂奶粉混勻。

B、封閉液：0.01M磷酸鹽緩沖液中加入0.05％吐溫-20制成，具體方法為：稱取8.00g氯化鈉，0.2g氯化鉀，1.44g磷酸氫二鈉，0.24g磷酸氫二鉀，500ul吐溫-20，定容至1000ml，使用前加入3％脫脂奶粉混勻。

C、清洗液：0.01M磷酸鹽緩沖液中加入0.05％吐溫-20制成，具體方法為：稱取80.00g氯化鈉，2.00g氯化鉀，14.40g磷酸氫二鈉，2.40g磷酸氫二鉀，5ml吐溫-20，定容至1000ml配制成10×清洗液，使用前用去離子水將10×清洗液稀釋成1×。

D、脫脂奶粉：購買自美國Signature Kitchens。

實施例2使用本發(fā)明試劑盒對細(xì)胞裂解液與蛋白芯片的反應(yīng)進行檢測

(1)蛋白芯片制備：使用sciFLEXARRAYER S1芯片點樣儀將21種抗體(購自immunoway)，2種陽參(biotin-anti-Mouse)點制芯片，芯片片基使用3種不同的表面化學(xué)修飾，分別為烷硅化修飾片基和親水多聚物修飾片基，購自德國SCHOTT公司、醛基化修飾片基，購自北京博奧生物。每種抗體點制4重復(fù)，每種陽參點制2個4重復(fù)(分別位于芯片反應(yīng)區(qū)域的左上方和右下方)構(gòu)成一個獨立反應(yīng)區(qū)。抗體排布如表1。抗體對應(yīng)的蛋白名稱如表2。

表1.一個獨立反應(yīng)區(qū)抗體排布。