[發明專利]達托霉素發酵培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201710922938.2
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN109593808B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 李繼安;林惠敏;徐魯;何強;盧雪歡;鄧旭;張建斌;李亞軍
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/04;C07K7/08;C12R1/465
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;余化鵬

本發明公開了一種達托霉素發酵培養基及其制備方法。該發酵培養基包括7.2?11g/100mL的碳源，1.65?4.0g/100mL的氮源，0.086?0.5g/100mL的無機鹽，0?0.1g/100mL的微量元素；所述碳源包括麥芽糊精和碳源A，所述麥芽糊精的用量為7.2?9g/100mL，所述碳源A為糖蜜或紅糖，所述碳源A的用量為0?1.8g/100mL；所述氮源為榴花酵母粉、黃豆粉、豆粕、花生粉和羽毛粉中的一種或多種。本發明的發酵培養基用于培養玫瑰孢鏈霉菌可以提高達托霉素的產量，同時大大降低生產成本，具有非常好的工業化應用前景。

技術領域

本發明涉及一種達托霉素發酵培養基及其制備方法。

背景技術

達托霉素是脂肽類家族的一員，屬于環十脂肽結構群，由玫瑰孢鏈霉菌(Streptomyces roseosporus)發酵而得，是目前全球首個成功開發的環脂肽類抗生素。達托霉素能在多個方面破壞細菌細胞膜功能，并殺死革蘭氏陽性菌，特性表現為抑制作用迅速、體內與體外殺菌作用所需的濃度低，抗生素作用的有效性時間長。

宇光海等通過響應面法優化達托霉素基礎發酵培養基，原基礎發酵培養基組分包括葡萄糖0.75g/100mL、糊精1.0g/100mL、可溶性淀粉1.0g/100mL、蛋白胨0.85g/100mL、酵母浸粉0.6g/100mL、干酪素0.85g/100mL、L-天冬氨酸0.1g/100mL、谷氨酸0.05g/100mL、MgSO₄ 0.05g/100mL、K₂SO₄0.05g/100mL、K₂HPO₄ 0.05g/100mL，pH值7.2-7.4，優化后得到糊精、可溶性淀粉和L-天冬氨酸的最佳濃度分別為0.7g/100mL、0.67g/100mL、0.04g/100mL。在此條件下，達托霉素的產量達到185.3mg/L，較優化前提高了73.7％(宇光海，尹艷麗，張垚.響應面法優化達托霉素發酵培養基的研究[J].化學與生物工程，2012.10.011)。但發酵培養基配方中，碳源應盡量使用價低的物料，以提高經濟效益，而可溶性淀粉不僅價格較高且在后續處理中比較繁瑣，淀粉殘留較多。另外氮源中使用了酵母浸粉及干酪素，這都是成本較高的發酵原料，再擴大生產時會使成本驟然增加，故需用更加廉價的原料代替。

何美儒通過正交實驗優化了達托霉素發酵培養基，后又利用設計、最陡爬坡實驗、CCD實驗相結合的統計學方法對影響達托霉素發酵的培養基組分及主要外在條件進行了優化和評價，確定了達托霉素搖瓶最佳發酵條件：葡萄糖1.3g/100mL，糊精4.0g/100mL，干酪素1.2g/100mL，黃豆餅粉0.45g/100mL，L-天冬氨酸0.26g/100mL，K₂SO₄ 0.41g/100mL，初始pH 8.、前體添加時間26h，達托霉素的預測值達到184.67mg/L，發酵驗證實驗測得達托霉素的產量為191.99mg/L，比優化前提高了2.25倍(何美儒.玫瑰孢鏈霉菌產達托霉素發酵工藝研究[D].浙江大學，2012.)。盡管如此，其最終的發酵產量仍然較低，無法達到工業化的水平。

目前，發酵生產達托霉素所用的原料成本較高，不能滿足工業化生產的需求。因此，有必要改善發酵培養基，開發能夠降低成本、提高達托霉素產量的發酵培養基。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服目前發酵培養基培養玫瑰孢鏈霉菌原料成本過高且產量不高的現狀，而提供一種能夠降低達托霉素發酵培養基成本且提高達托霉素產量的發酵培養基。利用本發明的發酵培養基培養玫瑰孢鏈霉菌，大大降低了生產成本，更適于工業化生產，同時也提高了達托霉素的發酵單位，提高了生產效率。