[發(fā)明專利]一種測定尿半乳糖的試劑盒及其制備使用方法

在審

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• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107741491A
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱雨;莊慶華;丁先駿;吳澤東;張金東
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務(wù)所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種適用于全自動生化分析的測定尿半乳糖的試劑盒及其制備使用方法。

背景技術(shù)

乳糖不耐受是由于小腸黏膜表面缺乏乳糖酶導(dǎo)致的乳糖消化和吸收障礙，并伴有腹脹、腹瀉、腹痛等一系列臨床癥狀。根據(jù)發(fā)生的原因，可將乳糖不耐受分為：先天性乳糖酶缺乏、成人型乳糖酶缺乏和繼發(fā)性乳糖酶缺乏。其中成人型乳糖酶缺乏是乳糖不耐受的主要類型，其發(fā)生可能在于飲食習(xí)慣造成乳糖酶基因的表達隨時間的延長而逐漸關(guān)閉，表現(xiàn)為隨年齡的增長，乳糖酶活性逐漸下降，直至消失。

乳糖不耐受癥的實驗室檢測方法有很多種，目前常用的有氫氣呼氣試驗、大便常規(guī)化驗、還原糖測定以及尿半乳糖試驗。其中，尿半乳糖試驗通過測定尿液中的半乳糖濃度間接地反映乳糖的消化吸收狀況，判斷受試者的乳糖耐受。以尿半乳糖水平為指標(biāo)，人體最適宜的濃度為41-116μmol/24h。

目前而言，測定尿半乳糖主要采用傳統(tǒng)的金標(biāo)試紙條法進行。此方法操作較為復(fù)雜，且人為因素對實驗結(jié)果影響較大，無法適用于全自動生化分析儀，需手工操作，測試緩慢，操作人員的熟練程度對結(jié)果影響較大，無法大規(guī)模的開展和推廣。

因此，目前急需一種檢測速度快、效率高，適用于全自動生化分析儀的測定尿半乳糖的試劑盒及其制備使用方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種檢測速度快、效率高，適用于全自動生化分析儀的測定尿半乳糖的試劑盒及其制備使用方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種測定尿半乳糖的試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為：

試劑R1：

試劑R2：

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式之一，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為：

試劑R1：

試劑R2：

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式之一，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為：

試劑R1：

試劑R2：

一種測定尿半乳糖的試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)配制試劑R1

a.按照試劑R1的組分含量，將KH₂PO₄溶于純化水中，攪拌均勻后，配制成R1緩沖液；

b.按照試劑R1的組分含量，將BSA緩慢的溶于制得的R1緩沖液中，攪拌均勻后，再將DETA.2Na和對羥基苯甲酸鈉溶于其中，即制得試劑R1；

(2)配制試劑R2

a.按照試劑R2的組分含量，將MOPSO和MOPSO.Na溶于純化水中，攪拌均勻后，配制成R2緩沖液；

b.按照試劑R2的組分含量，將BSA緩慢的溶于制得的R2緩沖液中，攪拌均勻后，再將POD、4-ATP、GAD溶于其中，混合液攪拌均勻，即制得試劑R2。

一種測定尿半乳糖的試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

(1)將待測樣品與試劑R1混合，37℃孵育5min；

(2)再與試劑R2混合，使其充分反應(yīng)；

(3)用全自動生化分析儀測定反應(yīng)后的吸光度差值；

(4)根據(jù)吸光度變化值計算出樣本中的尿半乳糖的濃度。

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式之一，所述步驟(1)和步驟(2)中，試劑R1和試劑R2按照體積比4:1混合。

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式之一，所述步驟(3)中，在主波長546nm、副波長660nm處測定吸光度A1，30s后測定吸光度A2。

作為本發(fā)明的優(yōu)選方式之一，所述步驟(4)中，吸光度變化值為A1和A2的變化值，即ΔA。

檢測原理：酸性條件下，尿液中的半乳糖經(jīng)過半乳糖糖氧化酶(GAD)水解生成的產(chǎn)物經(jīng)過氧化物酶(POD)、4-氨基安替比林(4-ATP)與對羥基苯甲酸鈉顯色，生產(chǎn)醌色素，通過測定該色素的增加，可求出尿半乳糖的濃度。

式中：ΔA_T以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔA_S以空白管吸光度作對照的校準(zhǔn)管吸光度值

C_S校準(zhǔn)液中UGA的濃度。

本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)點在于：