[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)L-氨基酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710915758.1
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN107893089B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 守屋美加;林和之;橫川明梨
• 申請（專利權(quán)）人: 味之素株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12P13/04
• 分類號(hào): C12P13/04;C12R1/15;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種用于生產(chǎn)L-氨基酸的方法，所述方法包括：

在培養(yǎng)基中培養(yǎng)具有L-氨基酸生產(chǎn)能力的細(xì)菌以在所述培養(yǎng)基中積累L-氨基酸；并且

從所述培養(yǎng)基收集所述L-氨基酸，

其中所述細(xì)菌經(jīng)修飾而與未修飾的菌株相比C4-二羧酸攝取載體的活性增加了，

其中所述C4-二羧酸攝取載體由一種或多種選自以下的蛋白質(zhì)組成：由dctA基因、dcuA基因、和dcuB基因編碼的蛋白質(zhì)，

其中所述L-氨基酸是L-谷氨酸，

其中所述細(xì)菌是棒狀桿菌coryneform bacterium，并且

其中所述細(xì)菌經(jīng)進(jìn)一步修飾而含有突變體yggB基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述dctA基因是編碼由SEQ ID NO: 16或18的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述dcuA基因是編碼由SEQ ID NO: 20的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述dcuB基因是編碼由SEQ ID NO: 22的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中通過增加編碼所述C4-二羧酸攝取載體的基因的表達(dá)來增加所述C4-二羧酸攝取載體的活性。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中通過增加所述基因的拷貝數(shù)和/或修飾所述基因的表達(dá)控制序列來增加所述基因的表達(dá)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)菌經(jīng)進(jìn)一步修飾而與未修飾的菌株相比磷酸酮醇酶的活性增加了。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述磷酸酮醇酶由D-木酮糖-5-磷酸磷酸酮醇酶和/或果糖-6-磷酸磷酸酮醇酶組成。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中通過增加編碼所述磷酸酮醇酶的基因的表達(dá)來增加所述磷酸酮醇酶的活性。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述細(xì)菌是屬于棒桿菌屬的細(xì)菌。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述細(xì)菌是谷氨酸棒桿菌。

12.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述L-谷氨酸以L-谷氨酸單銨或L-谷氨酸單鈉的形式收集。

13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述細(xì)菌經(jīng)進(jìn)一步修飾而與未修飾的菌株相比α-酮戊二酸脫氫酶和/或琥珀酸脫氫酶的活性降低了。

14.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述突變體yggB基因是具有突變的yggB基因，所述突變改善所述棒狀桿菌細(xì)菌的L-谷氨酸生產(chǎn)能力。

15.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述突變體yggB基因是具有下述(1)、(2)、或(3)中限定的突變的yggB基因：

(1) 編碼野生型YggB蛋白的419至533位處的氨基酸殘基的區(qū)域中的突變，

(2) 編碼野生型YggB蛋白的跨膜區(qū)的區(qū)域中的突變，和

(3) 所述突變的組合，

其中所述野生型YggB蛋白是由SEQ ID NO: 10的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。