[發明專利]一種毛漢十二卷離體培養方法

有效

• 申請號: 201710915542.5
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107568065B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 王姍;鮑華鵬;張曉霞
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷;許丹丹

1.一種毛漢十二卷離體培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）初代培養：選擇毛漢十二卷“稻妻”的葉片為外植體，經過洗衣粉清洗，流水沖洗1小時，將外植體轉到無菌操作臺上，先用75%酒精消毒10秒，用無菌水沖洗1次，再用0.1%氯化汞消毒5min或者用15%次氯酸鈉消毒15min，再用無菌水沖洗4次后，將葉片基部切除后，剪成1cm²的小塊接種于愈傷組織誘導培養基上，每瓶接一塊，愈傷組織誘導培養基為MS培養基，成分為6-芐氨基腺嘌呤1mg/L、激動素0.5 mg/L、萘乙酸0.1 mg/L、6g/L瓊脂、20g/L蔗糖；培養基pH值調至5.8，將接種后的外植體放在培養室適宜條件下培養，條件為溫度25±2℃，在紅光：藍光=1:1的光照條件下培養60天；

（2）繼代培養：愈傷組織誘導出來后，將愈傷組織轉入增殖分化培養基，培養基為MS培養基，成分為6-芐氨基腺嘌呤0.5mg/L、激動素0.5mg/L、萘乙酸0.01 mg/L、吲哚乙酸0.01mg/L、6g/L瓊脂、30g/L蔗糖；培養基pH值調至5.8；將轉接后的愈傷組織放在培養室適宜條件下培養，條件為溫度25±2℃，在光強為3000lux的連續強光，紅光：藍光=1:1下培養30天，每日光照時間12小時，以后每隔30天轉接一次，再生苗生長健壯，顏色翠綠，無玻璃化現象，增殖倍數達到10.5；

（3）生根培養：將苗高達到1cm以上的再生苗轉入生根培養基進行生根培養得到試管苗，生根培養基為1/2MS培養基，成分為萘乙酸0.5 mg/L、瓊脂6g/L、蔗糖30g/L；培養基pH值調至5.8；

（4）馴化移栽：將根長至1cm以上的試管苗取出清洗干凈，用0.1%高錳酸鉀浸泡后，放在通風處晾干，栽入營養土中，浸泡時間為0.5小時，營養土采用泥炭土：蛭石：珍珠巖：赤玉土=1:1:1:1。