[發明專利]一種植物的提取方法及提取物的應用

在審

• 申請號: 201710915524.7
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107652301A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 李洋
• 申請（專利權）人: 南京正寬醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61K31/366;A61P1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種植物的提取方法及提取物的應用。

背景技術

肝纖維化是慢性肝損傷向肝硬化發展的動態過程，過去的20年間，肝纖維化的研究取得了長足進展，證實肝纖維化與一定程度的肝硬化都是可逆的。近年來陸續出現了一些抗肝纖維化治療方法，包括化學藥、生物制劑、中藥與基因療法等，但是理想的臨床治療手段仍然缺乏，目前防治肝纖維的關鍵是針對與肝星狀細胞激活相關的環節，主要是：減輕肝損傷；抑制星狀細胞激活，減少細胞外基質產生；調節細胞因子紊亂，促進活化肝星狀細胞凋亡。

本發明涉及的化合物虎耳草素片用于治療慢性支氣管炎。本發明涉及的虎耳草素在制備抑制肝臟成纖維細胞增殖藥物中的用途屬于首次公開。

發明內容

本發明的目的在于提供一種植物的提取方法及提取物的應用，該植物為虎耳草。

技術方案：一種植物的提取方法，該植物為虎耳草，取虎耳草藥材粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，將上述濃縮后的提取液，加鹽酸調節pH＝3，石油醚萃取3-5次除去脂溶性成分，萃取后的水層加氨水調節pH＝9，過濾得沉淀，即為虎耳草素。

所述虎耳草素在制備預防或治療肝纖維化藥物中的用途。

所述虎耳草素為口服制劑或注射制劑。

所述口服制劑為片劑、膠囊劑或顆粒劑。

所述注射制劑為注射液或注射微乳。

本發明公開了虎耳草素在制備預防或治療肝纖維化的藥物中的應用，其治療效果好，對成纖維細胞NIH/3T3在10％小牛血清的刺激下的細胞增殖有顯著的抑制作用；虎耳草素對成纖維細胞NIH/3T3在TGF-β1的誘導下的細胞增殖有顯著的抑制作用，其治療效果好，對于肝纖維化的治療效果顯著優于虎耳草提取物，本發明所述虎耳草素是從傳統中藥虎耳草中提取得到的天然中藥單體，其對人體毒副作用低，可以顯著提高患者的用藥安全性和用藥依從性，進而大幅度改善了肝纖維化患者的治療效果和生活質量。本發明不僅拓寬了連翹苷元的應用范圍，同時還提高了連翹苷元的市場價值，同時安全性好，因此本發明為虎耳草素治療提供了一種安全、高效的備選藥物，利于滿足臨床治療的多方面需求。

具體實施方式

以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。

實施例1：取虎耳草藥材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，將上述濃縮后的提取液，加鹽酸調節pH＝3，石油醚萃取3次除去脂溶性成分，萃取后的水層加氨水調節pH＝9，過濾得沉淀16.4g，即為虎耳草素。

實施例2：取虎耳草藥材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，將上述濃縮后的提取液，加鹽酸調節pH＝3，石油醚萃取5次除去脂溶性成分，萃取后的水層加氨水調節pH＝9，過濾得沉淀17.8g，即為虎耳草素。

實施例3：取虎耳草藥材3kg粉碎后用95％乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，將上述濃縮后的提取液，加鹽酸調節pH＝3，石油醚萃取4次除去脂溶性成分，萃取后的水層加氨水調節pH＝9，過濾得沉淀16.2g，即為虎耳草素。

實施例4：采用MTT法評價虎耳草素對肝纖維化的抑制作用

1、方法：NIH/3T3細胞株購自引自ATCC(American Type Culture Collection)的中科院上海細胞所細胞庫。將對數生長期的亞融合的NIH/3T3細胞用0.25％胰酶消化，洗滌，離心后，用DMEM培養液(含10％FCS)制成1×10₄cell/ml的細胞懸液，臺盼藍染色鑒定存活率大于95％，按每孔100ul加入96孔板中，在37℃、5％CO₂培養24h同步處理后，棄上清，加入含有不同稀釋濃度藥物的DMEM培養液(含10％FCS)200ul，培養48h，每孔加入MTT溶液孵育4h。棄去培養液，加入150ulDMSO，振蕩10分鐘，使結晶溶解，酶標儀490nm處讀取OD值，結果以OD₄₉₀表示。

2.結果：

2.1形態學觀察

NIH/3T3在用藥前伸展良好，折光性較弱，有方向性，呈放射狀，細胞增殖的速度快；而加藥物24h后，成纖維細胞數目減少，形狀變得不規則，突起變短，細胞排列混亂，細胞內代謝產物增多。