[發明專利]一種穩定的補體C4檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201710915460.0
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107741499A
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 莊慶華;吳澤東;張金東;吳錚;丁先駿
• 申請（專利權）人: 安徽伊普諾康生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，尤其涉及一種穩定的補體C4檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

補體C4是一種多功能β1-球蛋白，存在于血漿中。C4是補體經典激活途徑的一個重要組分，它的測定有助于SLE等自身免疫性疾病診斷，治療和病因探討。其中，補體C4降低：見于免疫復合物引起的腎炎、系統性紅斑狼瘡、病毒性感染、狼瘡性癥候群、肝硬化、肝炎等；補體C4增高：見于各種傳染病、急性炎癥、組織損傷、多發性骨髓瘤等。

目前，補體C4的檢測方法主要有酶聯免疫吸附測定法、放射免疫法、化學發光法和免疫比濁法。其中，酶聯免疫吸附測定法精確、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁瑣，耗時長，不能適應大規模體檢篩查或急診的需要。放射免疫法靈敏度高，特異性強，但放射免疫反應是競爭性的反應，測得的值是相對量而非絕對量，且存在輻射和放射性污染。化學發光法精確度高，檢測速度快，但成本高昂，對配套設施要求高，無法應用于廣大中、基層的醫院和醫療衛生機構。所謂免疫比濁法，是利用抗原抗體反應原理，樣品中的補體C4與反應液中抗補體C4的抗體，在一個最佳反應條件下，形成抗原－抗體聚合物，使反應液產生濁度變化，產生的濁度與樣品中的補體C4含量呈正比，通過測定吸光度變化，與補體C4標準曲線比較，得出補體C4含量；但是由于補體C4臨床臨界值很低，當樣品中補體C4的含量處于正常生理范圍時，即抗原濃度很低時，產生抗原-抗體聚合物的量少，反應液濁度變化極小，吸光度變化就不能被檢出，就是說此方法靈敏度不夠。

膠乳增強免疫透射比濁法就是提高免疫透射比濁法的靈敏度，人血清中補體C4與相應抗體在溶液相遇，立即形成抗原--抗體復合物，形成一定濁度；該濁度高低在一定量抗體存在時與抗原的含量成正比，在340nm波長下測定濁度進行補體的定量測定；該方法具有操作簡便快速、自動化、定量準確、敏感度高等優點，可滿足門、急診和大規模體檢篩查等需要。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種操作簡便快速、自動化、定量準確、敏感度高的穩定的補體C4檢測試劑盒及其使用方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：一種穩定的補體C4檢測試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應含量為：

試劑R1：

其溶劑為純化水；

試劑R2：

其溶劑為純化水。

作為本發明的優選方式之一，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應含量為：

試劑R1：

其溶劑為純化水；

試劑R2：

其溶劑為純化水。

作為本發明的優選方式之一，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應含量為：

試劑R1：

其溶劑為純化水；

試劑R2：

其溶劑為純化水。

一種穩定的補體C4檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

(1)將待測樣品與試劑R1混合，37℃孵育1min；

(2)用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度A1；

(3)再與試劑R2混合，37℃孵育5min；

(4)用全自動生化分析儀測定反應后的吸光度A2；

(5)根據吸光度變化值計算出樣本中的補體C4的濃度。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(1)的試劑R1和步驟(3)的試劑R2的體積比為3:1。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(1)的待測樣品與試劑R1和試劑R2構成的試劑液之間的體積比為1:150。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(2)和步驟(4)中，在主波長340nm、副波長700nm處測定吸光度A1和A2。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(5)中，吸光度變化值為A1和A2的變化值，即ΔA。

試劑盒中各成分功效：

磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀、氯化鈉：配制成緩沖液，主要是起到緩沖作用，保證反應過程中反應體系環境的穩定，保證檢測結果不會受到波動和影響；

聚乙二醇6000：表面活性劑，增加聚氧乙烯聚丙乙烯共聚物與羊抗人C4特異抗體的結合性；