[發明專利]一種耐四環素的大腸埃希氏菌及應用

有效

• 申請號: 201710912385.2
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN107619805B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 孫裕光;沙莎;蘭仕梅;楊溢歡
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/10;C12Q1/18;A61K36/539;A61K36/708;A61K36/855;A61K36/704;A61K36/315;A61K36/195;A61K36/634;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京國昊天誠知識產權代理有限公司 11315
• 代理人: 吳家偉

本發明公開了一種耐四環素的大腸埃希氏菌應用，該菌株于2017年7月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.14456。本發明還公開了上述耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)在制備耐四環素的產品中的應用。本發明所提供的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)耐藥性狀穩定，半年后對其進行藥敏試驗，仍顯示出耐藥性質，該耐藥菌株穩定且很難逆轉。

技術領域

本申請屬于生物技術領域，具體地說，涉及一種耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)及應用。

背景技術

大腸桿菌病是人獸共患病，動物罹患大腸桿菌病的情況十分普遍，原因甚多，臨床反復、多次使用相同抗生素容易導致耐藥菌株的出現是其原因之一，耐藥菌株使抗生素失去抗菌活性而失效。因此耐藥菌株的獲得，是實驗室研究耐藥機理、尋找替代抗菌藥物的關鍵，也是有效控制養殖場大腸桿菌病發生的必要材料。

目前研究表明，耐藥菌株的獲得主要通過臨床分離、環境獲取、實驗室藥物誘導細菌耐藥等。其中，藥物誘導細菌耐藥是實驗室獲得耐藥菌株最為方便的途徑，而且在藥物誘導過程中能夠發現細菌對藥物的耐受情況，表觀細菌對藥物敏感到耐藥過程、耐藥規律以及對耐藥機制的探索。實驗室采用亞抑菌濃度的藥物對質控細菌菌株進行誘導，常常出現的問題是要求較高，操作繁瑣，耗費時間較長，且菌株容易出現污染等，使得該方法在短時間類不易獲得耐藥菌株。如何在簡單有效且耗時少地獲得實驗室藥物誘導耐藥菌株，是目前困擾實驗室研究人員的一大難題。

發明內容

有鑒于此，本申請針對亞抑菌濃度藥物誘導細菌耐藥法所出現的要求較高，操作繁瑣，耗費時間較長，且菌株容易出現污染的問題，提供了一種耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)及應用。

為了解決上述技術問題，本申請公開了一種耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)，該菌株于2017年7月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.14456。

進一步地，該菌株的形態特性如下：分離菌株能夠在麥康凱培養基上生長，呈紅色的、凸起的、圓滑的、濕潤的小菌落。

本發明還公開了一種上述的耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli) 的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、細菌的分離培養與形態學觀察：取病死鴨肝臟組織無菌接種于麥康凱瓊脂平板培養基，置恒溫37℃條件下培養18-24h觀察細菌生長情況；挑取培養基上成粉紅色的單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢，然后勾取相同的單個菌落接種于麥康凱瓊脂平板培養基上進一步分離純化，將分離純化的細菌再接種到瓊脂斜面上，編號為A，并保存備用；

步驟2、菌株A四環素藥敏試驗：將菌株A均勻涂布接種于營養瓊脂培養基上，按照K-B紙片擴散法進行四環素藥敏試驗，判定標準參照美國臨床實驗室標準協會藥敏紙片擴散法標準(2010版)；

步驟3、菌株A動物回歸試驗：將菌株A接種到營養肉湯培養基中，37℃搖振培養12h，菌液經麥氏比濁使菌液含量為1×10⁸.cfu/mL；試驗健康雛鴨 10只，隨機分為試驗組和對照組，每組5只；試驗組雛鴨肌肉注射菌液，1mL/ 只，對照組雛鴨肌肉注射生理鹽水，1mL/只，觀察1周并記錄雛鴨發病及死亡情況；

步驟4、四環素耐藥菌株誘導試驗：將菌株A進行四環素藥敏試驗，初次可選取四環素藥敏紙片抑菌圈邊緣的菌再次進行四環素藥敏試驗，重復多次四環素藥敏誘導試驗，直至選出四環素抑菌圈直徑變成0mm為止的耐藥菌株，將此菌株編號為B₃，即制備得到權利要求1所述的耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli)。

本發明還公開了一種上述的耐四環素的大腸埃希氏菌(Escherichia coli) 在制備耐四環素的產品中的應用。