[發明專利]檢測MLH1基因啟動子甲基化的引物對、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201710912081.6
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN109593840A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 傅新暉;黃京林;陳志婷;林漢杰;王婧璇;王磊;汪建平
• 申請（專利權）人: 傅新暉;黃京林;陳志婷;林漢杰;王婧璇;王磊;汪建平
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

1.一種檢測MLH1基因啟動子甲基化的引物對，其特征在于，所述引物對具有如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的堿基序列。

2.一種檢測MLH1基因啟動子甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物對。

3.根據權利要求2所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括2*master mix。

4.根據權利要求3所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括MgCl₂。

5.一種檢測MLH1基因啟動子甲基化的反應體系，其特征在于，所述反應體系包括權利要求1所述的引物對。

6.根據權利要求5所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的反應體系，其特征在于，所述反應體系為：DNA模板1-5μL、2*Master mix 10-12.5μL、MgCl₂ 2.5-3.5μL、SEQ ID NO.1引物0.6-1μL、SEQ ID NO.2引物0.6-1μL、無酶水加至15-20μL。

7.一種檢測MLH1基因啟動子甲基化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、將待檢測樣品的DNA進行亞硫酸鹽轉化；

(2)、以步驟(1)中的產物作為模板，采用權利要求1所述的引物對進行熒光定量PCR反應，收集熒光信號，繪制熔解曲線；

(3)、判讀待檢測樣品的熔解曲線。

8.根據權利要求7所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的方法，其特征在于，步驟(2)中所述熒光定量PCR反應的反應體系為：DNA模板1-5μL、2*Master mix 10-12.5μL、MgCl22.5-3.5μL、SEQ ID NO.1引物0.6-1μL、SEQ ID NO.2引物0.6-1μL、無酶水加至15-20μL。

9.根據權利要求7所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的方法，其特征在于，步驟(2)所述熒光定量PCR反應的反應程序為：92-98℃預變性5-10min→(92-98℃20s、58-62℃20s、72℃20s)40-45cycles→熔解溫度75-86℃，溫度每升高1℃獲取25次熒光信號→40℃10s。

10.根據權利要求7所述的檢測MLH1基因啟動子甲基化的方法，其特征在于，步驟(1)所述模板的濃度為20-100ng/μL。