[發(fā)明專利]一種快速分離外泌體的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710911748.0
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN109576210A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 原續(xù)波;戰(zhàn)琦;趙瑾;侯信;李學(xué)平;韓冬琳
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K47/22;A61K47/02
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12214
• 代理人: 王秀奎

1.一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，按照下述步驟進行：將超順磁納米顆粒-聚乙二醇-配體復(fù)合物、置于待分離樣品中進行孵育，將孵育完成后用的溶液進行磁分離并用緩沖溶液洗滌，即可得到基于外泌體的超順磁性納米粒子團簇，其中超順磁納米顆粒-聚乙二醇-配體復(fù)合物選擇聚乙二醇化的超順磁納米顆粒與激活的硫醇基配體反應(yīng)制備，氨基官能化的超順磁性Fe₃O₄納米顆粒與活性酯聚乙二醇馬來酰亞胺進行反應(yīng)，以實現(xiàn)超順磁納米顆粒的聚乙二醇化；配體與2-亞氨基四氫噻吩反應(yīng)得到激活的硫醇基配體；待分離樣品經(jīng)過超濾處理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，對待分離樣品進行超濾處理時，超濾管的截留分子量為3kDa-300kDa，在3-5℃離心20-40min，離心速度為100×g-100000×g；配體采用CD63抗體、CD9抗體、CD81抗體、CD82抗體、ALIX抗體、Tsg101抗體或者轉(zhuǎn)鐵蛋白中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，待分離樣品為含有外泌體的體液，如從血液樣本中得到的血清、唾液、尿液、精液或者母乳。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，超順磁納米顆粒-聚乙二醇-配體復(fù)合物與待分離樣品在30-40℃下孵育0.5-2h，將孵育完成后用的溶液進行磁分離，時間為10-5000min，優(yōu)選30—100min，使用磷酸緩沖溶液進行洗滌。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，在超順磁納米顆粒的聚乙二醇化中，將氨基官能化的超順磁性Fe₃O₄納米顆粒溶液與活性酯聚乙二醇馬來酰亞胺在硼酸鹽緩沖液中混合將混合物在室溫(20-25℃)下孵育1-3h，氨基官能化的超順磁性Fe₃O₄納米顆粒與活性酯聚乙二醇馬來酰亞胺的摩爾比為(1-10000)：(1-10000)，優(yōu)選(10-1000)：(10-1000)，更加優(yōu)選(10—100)：(500—1000)，活性酯聚乙二醇馬來酰亞胺的數(shù)均分子量為1000-100000，磁分離時間為10-5000min；優(yōu)選活性酯聚乙二醇馬來酰亞胺的數(shù)均分子量為4000-10000，磁分離時間為60-200min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速分離外泌體的方法，其特征在于，將配體與2-亞氨基四氫噻吩在硼酸鹽緩沖液中混合，在室溫(20-25℃)下孵育1-3h，以得到激活的硫醇基配體，使用含EDTA的硼酸鹽緩沖液透析3-5h，配體與2-亞氨基四氫噻吩以摩爾比為(1-10000)：(1-10000)，優(yōu)選(10-1000)：(10-1000)，更加優(yōu)選(10—100)：(600—1000)。

7.依照權(quán)利要求1—6之一所述的方法分離得到的外泌體在制備靶向治療藥物載體中的應(yīng)用。

8.超順磁納米顆粒-聚乙二醇-配體復(fù)合物在分離外泌體、制備基于外泌體的超順磁性納米粒子團簇、在制備靶向治療藥物載體中的應(yīng)用。

9.超濾離心在分離外泌體中的應(yīng)用。

10.PEG單元在調(diào)控超順磁性納米顆粒在外泌體周圍的分布情況中的應(yīng)用。