[發(fā)明專利]半胱氨酸改造的抗體?毒素偶聯(lián)物及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710910870.6
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN107789630A
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發(fā)明（設計）人: 朱義;王一茜;卓識;李杰;陳瀾;萬維李;余永國
• 申請（專利權）人: 四川百利藥業(yè)有限責任公司
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：抗體為半胱氨酸定點插入抗體，所述半胱氨酸插入位點包含選自以下3個插入位點的一個或多個位點：kappa/λ輕鏈恒定區(qū)Kabat編號第205位、輕鏈恒定區(qū)Kabat編號第206或IgG抗體重鏈恒定區(qū)Kabat編號第439位。

2.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：所述半胱氨酸插入位點氨基酸序列包含以下3個序列的一個或多個：

LC-205ins:GLSSPCVTKSF、LC-206ins:GLSSPVCTKSF或HC-439ins:TQKSLSCLSPGK，其中，C為目標抗體輕鏈205位或206位或重鏈第439位插入的半胱氨酸。

3.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：高活性細胞毒素通過連接子與插入的半胱氨酸游離巰基進行定點偶聯(lián)，連接子與插入的半胱氨酸偶聯(lián)的抗體輕鏈氨基酸序列為：GLSSPCVTKSF和GLSSPVCTKSF；連接子與插入的半胱氨酸偶聯(lián)的抗體重鏈氨基酸序列為：TQKSLSCLSPGK；

其中，C為目標抗體輕鏈205位或206位或重鏈第439位插入的半胱氨酸。

4.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：所述抗體輕鏈包括kappa或λ同種型。

5.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：所述抗體重鏈包括IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。

6.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：所述半胱氨酸包含巰基。

7.如權利要求5所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：所述巰基能夠進行化學偶聯(lián)。

8.如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物，其特征在于：通過連接子與半胱氨酸插入突變的游離巰基進行定點偶聯(lián)的高活性細胞毒素選自：MMAE、MMAF、PBD、SN-38或Dox及其類似物。

9.一種如權利要求1所述的半胱氨酸改造的抗體-毒素偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于：定點偶聯(lián)步驟為：首先使用還原劑還原抗體，解除抗體上改造的半胱氨酸殘基上的屏蔽，并通過陽離子交換層析或超濾換液等方式去除DTT與屏蔽物；然后使用氧化劑氧化抗體，使抗體的鏈間二硫鍵重新連接；最后加入Linker-drug與胱氨酸殘基上的游離巰基偶聯(lián)，并通過陽離子交換層析或超濾換液等方式去除未偶聯(lián)上抗體分子Linker-drug。