[發(fā)明專利]一種山銀花多糖的制備方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710910545.X
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN107602717B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設計）人: 丁侃;林黎艷
• 申請（專利權）人: 貴州中科健生物醫(yī)藥有限公司;遵義醫(yī)學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P9/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 李靜

本發(fā)明涉及一種山銀花多糖的制備方法，將山銀花進行乙醇脫脂、晾干后，用沸水提取，提取液加熱濃縮后進行透析，得到的透析內液加熱濃縮后，在冰浴條件下加入15v％的三氯乙酸攪拌均勻，用氫氧化鈉中和后離心，去除沉淀，取上清液透析，然后往得到的透析內液中加入80％乙醇，靜置過夜后離心，收集沉淀，干燥后得水提山銀花粗多糖，將其進一步用DEAE纖維素陰離子柱、Sephacryl S?200HR柱純化，即得。本發(fā)明的制備方法工藝簡單，操作方便，制得的山銀花多糖山銀花多糖可顯著抑制HMEC?1細胞管腔的形成，尤其當該多糖濃度為13.5μM時，對HMEC?1細胞管腔形成具有較強的抑制作用，可開發(fā)為抗血管生成的藥物。

技術領域

本發(fā)明涉及一種山銀花多糖的制備方法，屬于醫(yī)藥技術領域。

背景技術

血管生成是指在已存在的毛細血管網(wǎng)絡中生長出新血管的過程，在傷口愈合、風濕性關節(jié)炎、腫瘤生長和多種皮膚疾病中均有新的血管生成。血管生成在多種疾病發(fā)生中的重要作用提示我們抑制血管生成也許在這些疾病的治療中有積極地意義。

自20世紀70年代，F(xiàn)olkman提出血管生成對腫瘤的發(fā)生發(fā)展轉移有重要作用，并提出通過抑制血管形成，從而限制腫瘤獲得氧供和營養(yǎng)物質而餓死腫瘤來治療腫瘤的思路。

多糖為大分子物質，廣泛分布在各種生物體中，具有抗腫瘤，抗病毒，抗衰老，調節(jié)免疫力，降血壓，降血脂，降膽固醇，降血糖等作用。作用機制具有多效應，多靶點，多層面，多途徑等特點。多糖具有毒副作用低，來源廣泛，安全性高等優(yōu)點，研究已經(jīng)引起廣泛的關注。

現(xiàn)有技術研究報道，很多多糖、寡糖或其衍生物都具有抗血管生成的活性，其中糖胺聚糖類(如肝素)和巖藻聚糖類占有大部分，其它類多糖的抗血管生成活性報道較少。對于山銀花多糖目前鮮有研究。現(xiàn)有研究報導了山銀花多糖(灰氈毛忍冬)具有的抗氧化活性，但其制備方法及其在抗管腔形成方面的作用，未見報道。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術的不足，提供一種山銀花多糖的制備方法，工藝簡單，操作方便，制得的山銀花多糖能抑制HMEC-1細胞管腔形成，可開發(fā)為抗血管生成的藥物。

技術方案

一種山銀花多糖的制備方法，包括如下步驟：

(1)多糖提取：將山銀花進行乙醇脫脂后，晾干，然后用沸水提取2-6次，每次提取3-5h，合并提取液，加熱濃縮后得濃縮液，進行透析，將得到的透析內液加熱濃縮后，在冰浴條件下加入三氯乙酸攪拌均勻，使透析內液中三氯乙酸的濃度為15g/100ml，然后用氫氧化鈉中和后離心，去除沉淀，取上清液透析兩天，然后往得到的透析內液中加入80％乙醇，靜置過夜后離心，收集沉淀，用無水乙醇洗滌，最后置于真空干燥箱中干燥，得水提山銀花粗多糖；

(2)多糖純化：將水提山銀花粗多糖用DEAE纖維素陰離子柱進行分步純化，依次用H₂O、0.1M NaCl和0.2M NaCl洗脫，收集0.2M NaCl洗脫組分進行透析，將透析內液冷凍干燥得中間產(chǎn)物(初步純化的多糖LF-02)，將中間產(chǎn)物經(jīng)Sephacryl S-200HR柱純化，用0.2MNaCl洗脫，收集洗脫液進行透析，取透析內液冷凍干燥，即得山銀花多糖(LF-02-2)。

進一步，步驟(1)中，所述乙醇脫脂的方法是：將山銀花置于濃度為95％的乙醇中浸泡7天。

進一步，步驟(1)中，所述透析是將濃縮液裝入透析袋中，用流動水透析兩天。步驟(1)中兩次透析的方法相同。

進一步，步驟(1)中，所述離心操作的轉速為8000-10000rpm，時間為10-25min。步驟(1)中兩次離心的轉速和時間相同。

進一步，步驟(1)中，透析內液和80％乙醇的體積比為1:4。

進一步，步驟(1)中，所述真空干燥的溫度為45-55℃。