[發(fā)明專利]GINS4基因或GINS4蛋白作為生物標(biāo)志物在制備肺腺癌的預(yù)診斷試劑中的應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN108034719B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶永光;楊瑞
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué);楊瑞
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 馬強(qiáng);周棟

本發(fā)明公開了GINS4基因或GINS4蛋白可用于制備肺腺癌的預(yù)診斷試劑和試劑盒、預(yù)后評估標(biāo)志物及治療藥物等。本發(fā)明從肺腺癌和正常肺組織樣本中抽提RNA后逆轉(zhuǎn)錄，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測其中GINS4的表達(dá)，結(jié)果顯示GINS4在肺腺癌組織中高表達(dá)。提示GINS4可作為肺腺癌預(yù)診斷的分子標(biāo)志物。本發(fā)明為肺腺癌的輔助診斷和預(yù)后預(yù)測提供了強(qiáng)有力的分子生物學(xué)工具，具有深遠(yuǎn)的臨床意義和重要的推廣應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及GINS4基因或GINS4蛋白在制備肺癌診斷、預(yù)后評估及治療的應(yīng)用，具體涉及GINS4基因或GINS4蛋白作為生物標(biāo)志物在制備肺腺癌的預(yù)診斷試劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺癌是全球范圍最常見、死亡率最高的惡性腫瘤，我國肺癌形勢同樣相當(dāng)嚴(yán)峻，2015年我國肺癌新發(fā)73.33萬例，死亡61.02萬例，是我國第一大惡性腫瘤。肺癌根據(jù)組織學(xué)類型可分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)及非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，后者可細(xì)分為肺腺癌、肺鱗癌和大細(xì)胞肺癌，其中肺腺癌占所有肺癌的50％以上，是主要的病理類型。多數(shù)肺腺癌起源于較小的支氣管，為周圍型肺癌，故患者早期多無明顯的臨床癥狀，但部分患者可出現(xiàn)早期的血行轉(zhuǎn)移，且絕大多數(shù)患者在確診時(shí)已屬相對晚期，導(dǎo)致患者失去根治性手術(shù)的機(jī)會(huì)。因此，早期診斷和及早治療對肺腺癌者的療效與預(yù)后至關(guān)重要。

GINS4基因位于染色體8p11.21上，是促進(jìn)哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育的重要分子，其與Psf1、Psf2及Psf3共同組成GINS復(fù)合物，該復(fù)合物可進(jìn)一步與細(xì)胞分裂周期蛋白45(celldivision cycle 45，CDC45)及微小染色體維持蛋白(mini-chromosome maintenancehelicase，MCM)相互作用，共同參與DNA解旋過程，調(diào)控細(xì)胞增殖。近年有研究顯示，GINS復(fù)合物相關(guān)組分在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常且影響細(xì)胞惡性行為：其中Psf1在前列腺癌中高表達(dá)，且與患者腫瘤分級、臨床分期以及不良預(yù)后均顯著正相關(guān)，Psf1同樣也高表達(dá)于非小細(xì)胞肺癌，體外干擾Psf1后可抑制A549及H1299細(xì)胞增殖。Psf3在肺腺癌中高表達(dá)，且與患者預(yù)后低生存率顯著正相關(guān)。GINS4在膀胱癌中高表達(dá)，體內(nèi)外敲除GINS4可抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖能力；GINS4也高表達(dá)于結(jié)直腸癌組織中，且GINS4高表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良存在密切關(guān)系。但GINS4在肺腺癌中的具體生物學(xué)作用及與患者病情及預(yù)后的關(guān)系尚不明確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供GINS4基因或蛋白在制備肺腺癌診斷、預(yù)后評估及應(yīng)用。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，GINS4基因編碼的GINS4蛋白在肺腺癌中的表達(dá)明顯升高，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞惡性增殖及侵襲遷移的能力，在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。因此，GINS4基因或蛋白可成為肺腺癌診斷及預(yù)后評估的新標(biāo)志物，且可作為新的分子靶向位點(diǎn)開展臨床治療工作。GINS4高表達(dá)于胚胎組織，在物種進(jìn)化過程中十分保守，成熟個(gè)體中僅高表達(dá)于骨髓組織，在肺組織中表達(dá)較低。我們的研究顯示GINS4在肺腺癌組織中異常高表達(dá)，通過kaplanmeier-plotter(www.kmplot.com)數(shù)據(jù)庫中數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)高表達(dá)GINS4的肺腺癌患者預(yù)后相比低表達(dá)患者顯著較差。

通過本發(fā)明發(fā)明人的研究表明，GINS4基因或蛋白作為生物標(biāo)志物可用于制備肺腺癌的預(yù)診斷試劑和試劑盒，制備肺腺癌的預(yù)診斷預(yù)后評估試劑或治療藥物等。

本發(fā)明還提供了檢測肺腺癌的試劑盒，所述試劑盒中含有如下引物對：

用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測GINS4基因表達(dá)的引物對：

正向引物：5’-TCAAGCCTGTAATCCCAGCA-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物：5’-GTTCAAGCGATTCTCCTGCC-3’(SEQ ID NO.2)；

內(nèi)參基因β-Actin特異性PCR引物對：

正向引物：5’-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3’(SEQ ID NO.3)；