[發明專利]一種快速測定IL?6/IL?6受體抗體藥物生物學活性的方法

在審

• 申請號: 201710897630.7
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN107760760A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 王軍志;于傳飛;高凱;王蘭;曹俊霞;楊雅嵐
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;C12Q1/02
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 李紅偉,孟祥斌

1.一種快速測定IL-6/IL-6R抗體藥物生物學活性的方法，所述方法包括構建得到穩定表達SIE報告基因的效應細胞，用IL-6刺激激活報告基因表達，并用IL-6/IL-6R抗體藥物阻斷IL-6信號通路，根據測定的報告基因信號值擬合四參數曲線確定抗體生物學活性。

2.一種快速測定IL-6/IL-6R抗體藥物生物學活性的方法，所述方法包括：

(1)構建得到穩定表達SIE報告基因的效應細胞；

(2)將IL-6加至(1)所述細胞中刺激激活報告基因表達；

(3)將IL-6/IL-6R抗體藥物樣品及參比品等比例稀釋，將稀釋后的抗體分別轉移至步驟(2)中的細胞和IL-6混合物中，在37℃培養箱中進行孵育；

(4)加入熒光素酶底物，根據測定的報告基因信號值擬合四參數曲線確定抗體生物學活性。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中穩定表達SIE報告基因的效應細胞選自DS-1細胞、MH60.BSF2細胞、B9細胞293細胞、CHO細胞、NSO細胞、SP2細胞、HeLa細胞、BHK細胞、COS細胞、人肝癌細胞、549A細胞、3T3細胞中的任一種，優選為穩定表達SIE報告基因的DS-1細胞。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中報告基因為luciferase熒光素酶報告基因。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其中IL-6/IL-6R抗體藥物為托珠單抗、Sarilumab、Siltuximab、杰瑞單抗、藥明康德的WBP216、邁博太科的CMAB806、海正藥業批件號為2016L09574的單克隆抗體等上市及在研的針對IL-6或IL-6受體的抗體藥物。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述步驟(1)包括：用包含SIE序列的報告基因載體轉染DS-1細胞、MH60.BSF2細胞、B9細胞293細胞、CHO細胞、NSO細胞、SP2細胞、HeLa細胞、BHK細胞、COS細胞、人肝癌細胞、549A細胞或3T3細胞，并加入相應抗生素篩選得到穩定表達報告基因的單克隆細胞株。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：制備效應細胞懸液，按照2.5×10⁴-2×10⁵個/孔，優選5×10⁴個/孔的細胞密度。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：加入IL-6激活報告基因表達，IL-6濃度為10pg/mL-2μg/mL，優選IL-6濃度為100ng/mL。

9.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：托珠單抗稀釋起始濃度為1pg/mL-1mg/mL，優選為125μg/mL。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：托珠單抗等比例稀釋的比例為1:2-1:5，優選為1:3。

11.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：培養時間為4-22小時，優選為6小時。

12.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：使用熒光素酶試劑盒檢測化學發光值，優選為，使用promega公司的Bio-Glo熒光素酶試劑盒、Biovision公司的Luciferase熒光素酶報告基因檢測試劑盒、碧云天公司的熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測化學發光值。

13.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：在酶標儀上使用化學發光讀取相對化學發光單位值，通過數據處理擬合倒S型四參數曲線。

14.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：通過比較樣品與參比品四參數曲線的半抑制濃度值，得出樣品的相對效價。

15.權利要求1-14所述方法在IL-6/IL-6R抗體藥物的質量控制中的應用。