[發(fā)明專利]一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710892098.X
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107739747B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設計）人: 朱炫;葉昆;包璇;沈宇標;向沙沙
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12N1/20;C12R1/225;C12R1/02
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法，屬于微生物發(fā)酵領域。其包括以下工藝步驟:對超低溫保藏的羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌進行活化處理；將活化好的羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌發(fā)酵培養(yǎng)；在搖床培養(yǎng)24小時，測定培養(yǎng)基中葡萄糖和甘油的含量，培養(yǎng)過程中當葡萄糖低于20.0g/L，以及甘油低于10g/L，添加補料液以維持最初濃度。本發(fā)明利用兩種菌共發(fā)酵產(chǎn)生羅伊特林素，使得羅伊特林素能夠吸附在微小球結構中，實現(xiàn)羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌高密度發(fā)酵，提高羅伊特林素濃度。

技術領域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領域，具體涉及一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法。

背景技術

羅伊特林素是一種低分子量、pH值中性，水—水溶性物質，具有抗菌和殺蟲作用。腸道乳酸桿菌與人體胃腸功能的健康有密切關系。證據(jù)證明飲食乳酸菌療法能預防結腸癌的發(fā)生。

此外，由食品和藥物管理局（FDA，美國，1989）規(guī)定，使用Lactobacillus reuterin作為食物補充劑被認為是安全和健康的。

有研究表明羅伊特林素能使肉品凈化與保鮮。證據(jù)表明羅伊特林素能夠在豬肉表面和火腿冷藏時（7oC）減少單核細胞增生李斯特菌和大腸桿菌O157:H7的活力。因此羅伊特林素能夠作為一種天然的殺菌劑。

醋酸桿菌在發(fā)酵時置于搖床震蕩培養(yǎng)可以形成微小球結構，能夠吸附小分子物質，從而使得所需物質的濃度變大。

本發(fā)明利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵，使得羅伊特林素能夠吸附在微小球結構中以實現(xiàn)高密度發(fā)酵來產(chǎn)生羅伊特林素，具有很好的市場前景。

發(fā)明內容

針對現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法的技術方案。

所述的一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法，其特征在于包括以下工藝步驟:

1）對超低溫保藏的羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌進行活化處理；

2）將活化好的羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中在37℃恒溫搖床中進行24h有氧發(fā)酵，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨10.0g/L，牛肉浸粉5.0g/L，酵母浸粉4.0g/L，葡萄糖40.0g/L，20g/L 甘油，磷酸氫二鉀2.0g/L，乙酸鈉5.0g/L，檸檬酸三銨2.0g/L，硫酸鎂0.2g/L，硫酸錳0.05g/L，0.035mol/L的磷酸鉀緩沖液，滅菌冷卻到50 ℃條件下加入體積分數(shù)為2％的乙醇；

3）在搖床培養(yǎng)24小時，測定培養(yǎng)基中葡萄糖和甘油的含量，培養(yǎng)過程中當葡萄糖低于20.0g/L，以及甘油低于10g/L ，添加補料液以維持最初濃度，所述的補料液為含有10%葡萄糖和10%甘油的水溶液。

所述的一種利用羅伊氏乳桿菌與醋桿菌共發(fā)酵高密度生產(chǎn)羅伊特林素的方法，其特征在于所述的步驟1）中對超低溫保藏的羅伊氏乳桿菌和醋酸桿菌進行活化處理具體包括：

從-80℃超低溫保藏箱中取出用甘油保藏的羅伊氏乳桿菌，在 MRS 固體培養(yǎng)基上劃線，置于 37℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18-24h 后，利用接種環(huán)挑取單菌落接種到 10mLMRS 的液體培養(yǎng)基中，在 37℃恒溫生化培養(yǎng)箱中進行 24h 厭氧培養(yǎng)用以活化；

從-80℃超低溫保藏箱中取出用甘油保藏的醋酸桿菌，在固體培養(yǎng)基上劃線，置于37℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24h 后，利用接種環(huán)挑取單菌落接種到 10mL的液體培養(yǎng)基中，置于在37℃恒溫搖床中進行24h有氧發(fā)酵用以活化；所述的固體培養(yǎng)基含有葡萄糖10g/L，酵母粉10g/L，瓊脂粉20g/L，滅菌冷卻到50 ℃條件下加入體積分數(shù)為2％的乙醇；所述的液體培養(yǎng)基含有葡萄糖10g/L，酵母粉10g/L，滅菌冷卻到50 ℃條件下加入體積分數(shù)為2％的乙醇。