[發明專利]調控TFEB以減弱保護性自噬促進納米銀抗腫瘤治療的方法

在審

• 申請號: 201710891998.2
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN109549953A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 溫龍平;林俊;劉一鳴;張云嬌;沙銳;劉榴
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: A61K33/38
• 分類號: A61K33/38;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 單驍越

本發明提供一種通過調控TFEB的水平來減弱保護性自噬從而促進納米銀抗腫瘤治療的方法。本發明還提供TFEB敲除試劑在制備用于提高納米銀對腫瘤細胞的殺傷效果的藥物中的用途。本發明進一步涉及一種用于殺傷腫瘤細胞的試劑盒，所述試劑盒包含納米銀和TFEB敲除試劑。

技術領域

本發明涉及一種納米銀與TFEB的基因敲減/敲除手段聯用的抗腫瘤聯合給藥方法。本發明還提供TFEB敲除試劑在制備用于提高納米銀對腫瘤細胞的殺傷效果的藥物中的用途。本發明進一步涉及一種用于殺傷腫瘤細胞的試劑盒，所述試劑盒包含納米銀和TFEB敲除試劑。

背景技術

自噬是真核生物細胞內一種基本降解過程，當自噬發生時，雙層膜包裹細胞內非必要的或者功能失常的大分子物質、蛋白、細胞器形成自噬體，自噬體與溶酶體融合對內容物進行降解，實現物質的再利用，這個過程可以維持細胞穩態，具有很重要的生理以及病理學意義。自噬在發育分化、癌癥、神經退行性疾病、衰老、免疫等生理病理方面起著非常重要的作用。

納米材料是指在三維空間中至少有一維處于納米尺寸(0.1-100nm)或由它們作為基本單元構成的材料。很多納米顆粒都已經被報道可以引起細胞自噬，比如金屬及其氧化物納米材料：納米金、納米銀、納米氧化鐵、氧化錳、鎳鈷合金、氧化鋅、氧化鈦、氧化鋁、氧化鈰、氧化銅、氧化釩；碳基材料：水溶性納米富勒烯C60、內嵌釹原子的C60@Nd、羧基化碳納米管、氧化石墨烯；稀土材料：如氧化釤、氧化銪、氧化釓、氧化鋱、氧化釔、氧化鑭、氧化鐿、上轉化發光材料；另外還有量子點、二氧化硅、PAMAM樹枝狀高分納米顆粒等都被報道可以引起細胞自噬現象。納米材料引起的細胞自噬大多數情況是促進細胞死亡的，比如氧化錳納米顆粒、氧化鋅納米顆粒、鎳鈷合金納米顆粒、稀土金屬氧化物、納米金顆粒等，但也有少數納米材料引起的為保護性的細胞自噬，包括二氧化釩納米顆粒、氧化銅納米顆粒、銀納米顆粒。

納米銀就是將粒徑做到納米級的金屬銀單質。由于納米銀具有廣譜殺菌的效果，被應用于醫療領域，比如抗菌類醫藥及醫療器械，抗菌塑料及橡膠制品，抗菌紡織品及服裝鞋襪等。納米銀還具有很多別的生物學效應，比如抗真菌、抗病毒、消炎。作為為數不多的已經被應用于臨床的納米材料，近年的細胞以及小鼠實驗研究表明，納米銀還可能是一種潛在的抗腫瘤藥物。納米已經在多種癌細胞中被證實具有很強的細胞殺傷效果，包括造成氧化壓力、DNA損傷、細胞周期停滯、凋亡、壞死等。

納米銀在動物模型中的抗腫瘤效果也得到了驗證。在道爾頓淋巴腹水瘤小鼠模型中，相對于沒加納米銀處理組，納米銀對腹水中癌細胞進行殺傷，很好的控制了腹水的體積。另外一項研究顯示，納米銀對惡性黑色素瘤具有很好的殺傷效果，用細胞穿膜肽TAT修飾納米銀以增加其穿透細胞的效果后，黑色素瘤的殺傷效果得到了進一步的提升，與用阿霉素處理的抑瘤效果相似。不過阿霉素處理組小鼠體重明顯下降，而納米銀處理組小鼠的體重還有一定程度的增加，顯示了其更小的副作用。腫瘤血管的生成是腫瘤生長、侵潤、轉移過程中至關重要的一步，納米銀抗腫瘤的另外一個特點是抑制腫瘤血管的生長。在鏈唑霉素刺激誘導大鼠腫瘤模型中，可以見到明顯的腫瘤血管生成，納米銀處理后，新腫瘤血管生成的現象被抑制。

申請人2014年發表于Autophagy上的研究結果顯示，納米銀可以引起細胞自噬，并且無論通過自噬上游抑制劑wortmannin或者自噬下游抑制劑bafilomycin A1處理細胞，還是通過轉染ATG5siRNA來減弱細胞內自噬水平，都會進一步增加納米銀處理導致的細胞死亡。這就表明納米銀引起的自噬起著保護癌細胞生存的作用。進一步B16黑色素瘤荷瘤鼠實驗證實自噬抑制劑wortmannin可以顯著增加納米銀對B16黑色素瘤的抑制效果。我們的研究從細胞水平和動物水平都證實了納米銀引起保護性的細胞自噬，所以抑制保護性自噬可能是一個有用的增強納米銀抗腫瘤效果的方案。