[發(fā)明專利]一種具有降脂功能的根皮紅素的制備方法

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• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107619843A
• 公開（公告）日: 2018-01-23
• 發(fā)明（設計）人: 孟永宏;王娟;鄧紅;郭玉蓉
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12P19/60
• 分類號: C12P19/60
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司61201
• 代理人: 高雪霞

技術領域

本發(fā)明涉及一種具有降脂功能的根皮紅素的制備方法。

背景技術

蘋果中含有維生素、礦物質、糖類、酸類、果膠以及蘋果多酚、類黃酮等多種物質，具有生津、潤肺、開胃、止瀉、通便之功效。蘋果中類黃酮的含量隨著品種和種植地的不同而有所差異，其含量約為114～803μg/g，是天然優(yōu)質的抗氧化劑。然而，在蘋果汁和蘋果酒的加工過程中，隨著植物細胞組織結構的破壞，釋放出的多酚氧化酶(PPO)在氧氣(O₂)的參與下產(chǎn)生酶促反應，生成許多新的多酚氧化物是造成果汁褐變和劣變的主要原因之一。多酚氧化酶是一種含銅離子的金屬蛋白體，它的催化作用分為兩種：一種是選擇性地催化酚羥基化生成鄰二酚，鄰二酚產(chǎn)物繼續(xù)被氧化生成鄰苯醌；另一種是先在多酚氧化酶的作用下形成不穩(wěn)定的鄰苯醌類化合物，然后再進一步通過非酶氧化反應聚合生成黑色素，如兒茶素類多酚在多酚氧化酶與氧氣作用下生成鄰苯醌類，鄰苯醌類化合物再進一步生成茶黃素或茶紅素類物質。多酚氧化酶可作用于一元酚、鄰二酚和對二酚等底物，科學研究中經(jīng)常利用與鄰苯二酚的反應測定多酚氧化酶活性強度。酶促褐變后的果汁中含有大量的多酚氧化產(chǎn)物，在傳統(tǒng)果汁加工過程中經(jīng)過脫色樹脂進行吸附去除，以便維持果汁的色值、儲藏穩(wěn)定性。但是，長久以來，人們并沒有重視和研究生產(chǎn)中大量產(chǎn)生的蘋果多酚氧化產(chǎn)物，其對果汁褐變、劣變的影響和生物功能尚不清楚。

目前國內外主要是通過研究不同蘋果多酚對多酚氧化酶催化特性的影響，為工業(yè)生產(chǎn)蘋果汁減少酶促褐變提高色值提供理論依據(jù)。蘋果中的多酚物質主要為黃酮醇類物質(槲皮苷、蘆丁)、黃烷醇類物質(原花青素、兒茶素類)、二氫查耳酮類(根皮苷、根皮素)、羥基肉桂酸(綠原酸)等。宋燁等通過高效液相色譜法測定分析了不同蘋果品種中多酚的組成及果實的褐變度，結果顯示，果實的褐變度與根皮苷、兒茶素、原花青素的相關性較高，綠原酸與果實褐變度相關性較低。Oszmianski等通過添加不同濃度的綠原酸和兒茶素研究根皮苷的酶促氧化速率，進而根據(jù)褐變值判斷同一反應體系中綠原酸和兒茶素對根皮苷氧化物積累的促進作用，但是有關蘋果多酚褐變的反應歷程尚不清楚，也沒有對其氧化產(chǎn)物進行分離鑒定。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種簡單、高效的制備具有降脂功能的根皮紅素的方法。

解決上述技術問題所采用的技術方案是：將根皮苷溶解于含無水乙醇的pH＝5.0～7.5的磷酸鹽緩沖液中，然后加入多酚氧化酶，所得反應液在25～45℃下攪拌24～48小時，反應完后用乙酸乙酯萃取，所得水相用無水乙醇脫鹽后，再用體積分數(shù)為80％的甲醇水溶液重結晶，得到結構式如下的根皮紅素：

上述制備方法中，所述含無水乙醇的磷酸鹽緩沖液中無水乙醇的體積濃度為10％～40％，優(yōu)選無水乙醇的體積濃度為20％～30％。

上述制備方法中，所得反應液中根皮苷的濃度為0.5～5.0mg/mL，優(yōu)選根皮苷的濃度為2.0～4.0mg/mL。

上述制備方法中，所得反應液中多酚氧化酶的活性為10～50U/mL，優(yōu)選多酚氧化酶的活性為25～35U/mL。

上述制備方法中，進一步優(yōu)選將所得反應液在35～40℃下攪拌48小時。

上述制備方法中，所述磷酸鹽緩沖液的pH優(yōu)選6.0～7.0。

本發(fā)明以根皮苷為反應原料，以乙醇為促進劑，采用多酚氧化酶(PPO)催化根皮苷氧化反應，顯著提高了PPO酶促根皮苷氧化反應制備根皮紅素(POP2)的轉化率，縮短了反應時間，且根皮苷完全轉化成POP2，其中根皮苷的轉化率最大可達90.2％，相對于未添加乙醇提高了2.4倍；通過乙酸乙酯萃取和甲醇重結晶，POP2的純度可達96.8％。其反應歷程如下：

附圖說明

圖1是根皮苷氧化物POP2的質譜圖。

圖2是根皮苷氧化物POP2的紅外光譜圖。

圖3是pH對POP2產(chǎn)率的影響。

圖4是根皮苷濃度對POP2產(chǎn)率的影響。

圖5是溫度對POP2產(chǎn)率的影響。

圖6是無水乙醇濃度對PPO酶促氧化反應的影響。

圖7是POP2、根皮苷對DPPH自由基清除活性測定。

圖8是POP2、根皮苷對ABTS自由基清除活性測定。

圖9是POP2對3T3-L1前脂肪細胞增殖的影響。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明的保護范圍不僅限于這些實施例。

實施例1