[發(fā)明專利]一種湖北海棠的組織培養(yǎng)方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710888809.6 | 申請日： | 2017-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN107637520A | 公開（公告）日： | 2018-01-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 范俊俊;張往祥;譚芊芊 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京林業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 210037 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 湖北 海棠 組織培養(yǎng) 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及植物無性繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種湖北海棠的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)
湖北海棠(Malus hupehensis)是薔薇科(Rosaceae)蘋果屬(Malus)植物，在中國廣泛分布，不僅具有重要的觀賞價值和藥食兼用價值，而且由于生長強(qiáng)健、抗性強(qiáng)、適應(yīng)范圍廣，在中國黃河流域以南地區(qū)常作為蘋果屬優(yōu)良砧木。由于天然林的過度開發(fā)利用，湖北海棠的天然群落遭到了嚴(yán)重破壞，野生資源存量急劇下降。1997年世界自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)就已經(jīng)把湖北海棠列入瀕危物種。因此對湖北海棠這一種質(zhì)資源進(jìn)行有效的保存、高效的繁殖已經(jīng)成為一個日趨緊迫的問題。
盡管湖北海棠具有無融合生殖現(xiàn)象，但個體間仍存在差異，播種后代存在一定的分化現(xiàn)象，因此無性繁殖技術(shù)對湖北海棠的良種選育和良種的無性化推廣具有重要意義。目前對湖北海棠的無性繁殖研究主要是采用植物扦插繁殖技術(shù)，但成活率不高，為推動湖北海棠優(yōu)良無性系的選育和大規(guī)模的育苗生產(chǎn)，有必要對湖北海棠組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行發(fā)明創(chuàng)造。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種湖北海棠組織培養(yǎng)方法，旨在解決湖北海棠播種育苗個體間存在差異、繁殖效率低等問題，為湖北海棠種質(zhì)資源的保存，快速、高效繁殖提供重要參考。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
一種湖北海棠的組織培養(yǎng)方法，包含以下步驟：
S1、外植體的消毒處理：選取一年生湖北海棠實(shí)生苗半木質(zhì)化單芽莖段作為外植體，先用洗衣粉溶液浸泡30min，并用軟毛刷刷洗表面臟污，然后流水沖洗2h后置于超凈工作臺中，用質(zhì)量濃度為0.1％的HgCl2溶液消毒7min，再用無菌水沖洗5次，沖洗完后切除莖段與藥液接觸的部分，在無菌濾紙上切成1～2cm的莖段；
S2、初代培養(yǎng)：將步驟S1處理后的1～2cm莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)，直至外植體腋芽萌發(fā)，長成2～3cm的植株，且培養(yǎng)室溫度23～27℃，空氣相對濕度50～60％，光照時間為12h·d-1，光照強(qiáng)度1500lx，并定期噴灑酒精；
S3、繼代培養(yǎng)：將步驟S2獲得的植株接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到叢生芽，且培養(yǎng)室溫度23～27℃，空氣相對濕度50～60％，光照時間為12h·d-1，光照強(qiáng)度1500lx；
S4、生根培養(yǎng)：將步驟S3過程獲得的高度為2～3cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，且培養(yǎng)室溫度23～27℃，空氣相對濕度50～60％，光照時間為12h·d-1，光照強(qiáng)度1500lx；
S5、煉苗移栽：當(dāng)根長到2～3cm時，將培養(yǎng)瓶敞口放置，煉苗3～5d得到試管苗，用鑷子將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去殘留在根部的培養(yǎng)基，保證根部的完整性，再用質(zhì)量濃度為0.1％的多菌靈對試管苗根部進(jìn)行蘸根處理后移栽到基質(zhì)中，放在溫室中，并每天噴霧澆水。
進(jìn)一步改進(jìn)在于，在HgCl2消毒和無菌水沖洗過程中，輕輕搖晃無菌瓶，使液體與外植體充分接觸。
進(jìn)一步改進(jìn)在于，步驟S5中所述的基質(zhì)由珍珠巖和蛭石混合組成，且珍珠巖和蛭石的質(zhì)量比為1:1。
進(jìn)一步改進(jìn)在于，步驟S5中所述的基質(zhì)在使用前兩天用質(zhì)量濃度為0.1％的高錳酸鉀溶液對使用基質(zhì)進(jìn)行消毒。
進(jìn)一步改進(jìn)在于，步驟S2所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA+30g·L-1蔗糖+7.0g·L-1瓊脂+2.0g·L-1PVP。
進(jìn)一步改進(jìn)在于，步驟S3所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.5mg·L-16-BA+0.05mg·L-1IBA+30g·L-1蔗糖+7.0g·L-1瓊脂+0.5g·L-1PVP。
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