[發(fā)明專利]一種用于提取大豆種子基因組DNA的細(xì)胞裂解液及其提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710888077.0
• 申請(qǐng)日: 2017-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN107574166B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳復(fù)生;夏義苗;郝莉花;杜艷;左貫杰;李宇健;趙自通;張曉旭;陳晨;周龍正;張麗芬;辛穎;劉伯業(yè)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 上海智力專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31105
• 代理人: 周濤

1.一種大豆種子基因組DNA的提取方法，所述提取方法包括細(xì)胞裂解過(guò)程以及純化DNA的過(guò)程，其特征在于：

所述細(xì)胞裂解過(guò)程為：將獲取的大豆種子細(xì)粉與細(xì)胞裂解液混勻，其中，每1ml細(xì)胞裂解液混合0.08～0.1g大豆種子細(xì)粉，然后置于55～65℃水浴至少60分鐘，然后離心取上清液；

所述細(xì)胞裂解液為0.02g/ml的SDS，0.05mol/L的Tris-HCl，0.05mol/L的EDTA，以及0.15mol/L的NaCl的純水溶液；所述細(xì)胞裂解液的pH值為8；

所述的純化DNA的過(guò)程包括以下步驟：

步驟1，取所述細(xì)胞裂解獲得的上清液，向其中加入等體積的氯仿和異戊醇的混合液，所述氯仿和異戊醇的混合液中氯仿與異戊醇的體積比為24:1，充分混勻后離心取上清液；

步驟2，向步驟1獲得上清液加入等體積的所述氯仿和異戊醇的混合液，充分混勻后離心取上清液；

步驟3，向步驟2獲得的上清液加入2.5倍體積的無(wú)水乙醇，于-20℃靜置后離心，棄上清，取沉淀；

步驟4，向步驟3的沉淀加入70％的乙醇洗滌，離心棄上清，取沉淀，重復(fù)洗滌一次，晾干；

步驟5，向步驟4獲得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀，再加入RNA酶，混勻，37℃培育30分鐘；

步驟6，向步驟5獲得的混合液中加入等體積的氯仿和異戊醇的混合液，所述氯仿和異戊醇的混合液中氯仿與異戊醇的體積比為24:1，充分混勻后離心取上清液；

步驟7，向步驟6所獲得的上清液中加入2.5倍體積的無(wú)水乙醇，于-20℃靜置后離心，棄上清，取沉淀；

步驟8，向步驟7的沉淀加入70％的乙醇洗滌，離心棄上清，取沉淀，重復(fù)洗滌一次，晾干；

步驟9，向步驟8獲得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀，-20℃保存。

2.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：

所述大豆種子細(xì)粉為通過(guò)80目篩的細(xì)粉。

3.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步驟1、步驟2和步驟6中，所述離心的條件為12000～14000轉(zhuǎn)/分鐘，常溫下離心10-20分鐘。

4.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步驟4和步驟8中，所述離心的條件為10000～12000轉(zhuǎn)/分鐘，4℃下離心5-10分鐘。

5.如權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步驟3和步驟7中，加入無(wú)水乙醇后，于-20℃靜置30分鐘以上，再在4℃下，12000-16000轉(zhuǎn)/分鐘離心10-20分鐘。