[發(fā)明專利]一種鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710887514.7
• 申請(qǐng)日: 2017-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107557489B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵秀玲;張偉;范曉虹;吳興海;厲艷;張京宣;宋濤;王簡(jiǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895
• 代理公司: 青島清泰聯(lián)信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37256
• 代理人: 高洋

1.一種鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：提取待測(cè)植物的基因組DNA；以待測(cè)植物的基因組DNA為模板，利用分別以葉綠體DNA的rbcL基因和核糖體DNA的ITS基因?yàn)榉肿訕?biāo)記的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序，對(duì)序列進(jìn)行拼接和糾正，獲取得到序列矩陣，其中，所述rbcL基因的上游引物的序列為SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列為SEQ ID NO:2所示，所述ITS基因的上游引物的序列為SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列為SEQ ID NO:4所示；

步驟2：基于所述序列矩陣建立進(jìn)化樹(shù)，比較待測(cè)植物在進(jìn)化樹(shù)的位置和支系情況；

步驟3：基于所述序列矩陣建立DNA條形碼，確定DNA條形碼的間隔區(qū)的大小和位置；

步驟4：分別取以rbcL基因和ITS基因作為分子標(biāo)記獲取的步驟2和步驟3的鑒定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，如果鑒定結(jié)果一致，則該鑒定結(jié)果為鑒定待測(cè)植物的分類地位和物種的結(jié)果，所述結(jié)果包括：

如進(jìn)化樹(shù)顯示支系特征各自為單系，則步驟2鑒定多個(gè)待測(cè)物種之間屬于不同分類地位和物種，如進(jìn)化樹(shù)顯示支系數(shù)量為多個(gè)且每個(gè)支系中同時(shí)混雜這多個(gè)待測(cè)物種，則步驟2鑒定多個(gè)待測(cè)物種之間屬于相同分類地位和物種；

如進(jìn)化樹(shù)顯示支系數(shù)量為多個(gè)，且滿足每個(gè)支系中同時(shí)混雜著多個(gè)待測(cè)物種，當(dāng)多個(gè)支系之間存在產(chǎn)生雜交的兩個(gè)物種，則步驟2鑒定多個(gè)待測(cè)物種之間屬于相同分類地位和物種；

當(dāng)DNA條形碼中有間隔，則步驟3鑒定多個(gè)待測(cè)物種之間不屬于相同分類地位和物種；當(dāng)DNA條形碼中無(wú)間隔，則步驟3鑒定多個(gè)待測(cè)物種之間屬于相同分類地位和物種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法，其特征在于：所述rbcL基因在步驟1中的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)熱4min；94℃30s，50℃30s，72℃1.0min,36個(gè)循環(huán)；72℃10min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法，其特征在于：所述構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)的方法為鄰接法。

4.一種權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法在鑒定裂葉牽牛(Pharbitis hederacea Jacq.)、牽牛(Pharbitis nil(L.)Roth.)和圓葉牽牛(Pharbitis purpurea(L.)Roth)的分類地位和物種的應(yīng)用。

5.一種權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的鑒定牽牛屬及近緣屬的分類地位和物種的方法在鑒定中藥材牽牛子中的應(yīng)用。