[發明專利]一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法

在審

• 申請號: 201710886291.2
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107686814A
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發明（設計）人: 李悅明;周文禮;許麗娜;張文慧;夏修巒;徐建春;范棟
• 申請（專利權）人: 青島科海生物有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 青島智地領創專利代理有限公司37252
• 代理人: 張紅鳳

1.一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于，依次包括以下步驟：

a取一定量的有細菌污染未分離純化的裸藻藻液，對所述裸藻藻液進行離心，將離心得到的藻泥清洗并收集；

b對步驟a收集的藻泥進行稀釋，得稀釋液，備用；

c配制裸藻自養所需液體培養基，向該液體培養基中加入瓊脂粉，通過蒸汽滅菌鍋滅菌，得滅菌后的培養基；

d待滅菌后的培養基冷卻后，向其中加入抗生素，混勻，傾倒平板；

e取步驟b所得稀釋液50～100μL，置于平板中，均勻涂布；

f將涂布平板置于恒溫光照箱進行培養；

g挑取單藻克隆，將其置于步驟d的培養基中進行二次劃線接種分離，然后將劃線平板置于恒溫光照箱進行培養；

h將劃線平板中的單藻克隆轉移至無菌96孔細胞培養板，恒溫光照箱進行培養；

i將96孔細胞培養板的藻液轉移至三角瓶中，恒溫光照箱進行擴大培養，即得裸藻藻種。

2.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于步驟a中離心步驟包括：

1)將裸藻藻液置于離心瓶中，設定離心轉速為3000～5000rpm，時間為1.0～3.0min；

2)傾去上層液體，經離心后的藻泥沉淀在離心瓶底部，向該離心瓶中加入經滅菌后的生理鹽水，渦旋混勻；

3)進行二次離心，設定離心轉速為3000～5000rpm，時間為1.0～3.0min；

4)重復步驟2)和3)后，將所得藻泥合并收集。

3.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟b中，通過滅菌后的生理鹽水對藻泥進行稀釋，稀釋倍數為10^-3～10^-6。

4.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：裸藻自養所需液體培養基，每升去離子水中其它組分配比為：硝酸鈉50～100mg/L、磷酸二氫鉀5～10mg/L、乙二胺四乙酸鈉3～6mg/L、硫酸鋅0.010～0.030mg/L、硫酸銅0.01～0.02mg/L、氯化錳0.010～0.020mg/L、硫酸鎂20～40mg/L、硫酸鐵30～70mg/L、氯化鈣1.0～1.5mg/L、鉬酸銨0.003～0.007mg/L、維生素B1 0.001mg/L、維生素B12 0.005mg/L、生物素0.005mg/L和氯化鈷0.010～0.020mg/L。

5.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟c中，所述瓊脂粉的加入量占液體培養基質量的0.5％～1.0％。

6.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟d中，所述抗生素及添加濃度分別為青霉素20～60ppm、氯霉素20～60ppm、土霉素30～70ppm、鏈霉素40～80ppm。

7.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：所述步驟f、g、h、i中的恒溫光照箱培養條件為：光照度1000～3000lx，溫度22～28℃，光暗比L:D＝12h:12h，培養2～5天。

8.根據權利要求1所述的一種平板固體培養基分離純化裸藻藻種的方法，其特征在于：步驟i所述的96孔細胞培養板中，每孔液體培養基的添加量為0.3～0.5mL。