[發(fā)明專利]長鏈非編碼RNA lnc-ALVE1-AS1 表達檢測引物及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710883276.2
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107488750B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設計）人: 崔恒宓;胡序明;陳世豪
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體涉及一種長鏈非編碼RNA lnc?ALVE1?AS1表達檢測引物及試劑盒。所述引物包括鏈特異性RT引物和熒光定量PCR檢測引物；其中鏈特異性RT引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示。本研究發(fā)明還提供了lnc?ALVE1?AS1表達檢測試劑盒，為lnc?ALVE1?AS1表達規(guī)律分析提供了方法和基礎，在生產實踐可用于檢測雞群的禽白血病天然免疫狀態(tài)。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體涉及一種長鏈非編碼RNAlnc-ALVE1-AS1表達檢測引物及試劑盒。

背景技術

內源性反轉錄病毒(endogenous retroviruses)是基因組成分，被認為源于進化中感染生物體的反轉錄病毒。作為遠古反轉錄病毒感染在宿主體內的殘留，加之過去對它的功能不夠了解，曾將其視為垃圾DNA(Junk DNA)。直至最近有研究表明，某些內源性反轉錄病毒不僅對早期胚胎發(fā)育和胚胎干細胞的多能性具有重要作用，還可能與細胞天然免疫有關。

最新研究發(fā)現(xiàn)，內源性反轉錄病毒轉錄物是長鏈非編碼RNA(long non-codingRNA， lncRNA)的重要來源，具有激活干擾素應答反應的潛能。事實上，lncRNA在細胞生物學調控中的作用越來越受到重視，在抗病毒天然免疫中也具有重要調節(jié)作用。內源性反轉錄病毒衍生的lncRNA在對抗外源性反轉錄病毒增殖的作用機制將逐漸被闡明，有望成為抵抗外源性病毒的新型疫苗或免疫增強劑。

禽內源性白血病病毒ALVE是最早發(fā)現(xiàn)的內源性反轉錄病毒，可能與宿主免疫應答和遺傳抗性有關。特別是，來源于雞1號染色體上的內源性反轉錄病毒ALVE1(長度為7.5kb)與禽白血病病毒高度同源，可能與禽白血病病毒的感染和增殖具有一定關聯(lián)。

發(fā)明內容

本發(fā)明通過高通量測序在雞基因組中鑒定出一條禽內源性反轉錄病毒ALVE1衍生的反義長鏈非編碼RNA，命名為lnc-ALVE1-AS1。研究表明，lnc-ALVE1-AS1可以激活細胞抗病毒干擾素應答反應并抑制與其高度同源的外源性J亞群禽白血病病毒增殖。因此，進一步了解 lnc-ALVE1-AS1在不同抗性品系雞中的表達規(guī)律顯得尤為重要。本發(fā)明的目的是提供一種能檢測lnc-ALVE1-AS1表達的檢測引物及試劑盒。

本發(fā)明提供了一種用于長鏈非編碼RNA lnc-ALVE1-AS1表達檢測的引物，包括鏈特異性RT引物和熒光定量PCR檢測引物；所述鏈特異性RT引物的序列如SEQ ID NO.8和SEQID NO.9所示；所述熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示。

本發(fā)明進一步公開了上述引物在制備lnc-ALVE1-AS1表達檢測試劑盒中的應用。

一種長鏈非編碼RNAlnc-ALVE1-AS1表達檢測試劑盒，包括鏈特異性RT引物、逆轉錄試劑、熒光定量PCR檢測引物和定量PCR檢測試劑；所述鏈特異性RT引物的序列如SEQ IDNO.8 和SEQ ID NO.9所示；所述熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.10和SEQ IDNO.11 所示。

本發(fā)明提供的檢測lnc-ALVE1-AS1表達規(guī)律的表達檢測試劑盒，為檢測lnc-ALVE1-AS1 的表達規(guī)律提供了研究方法和基礎。此外，在生產實踐可用于檢測雞群的禽白血病天然免疫狀態(tài)。

附圖說明

圖1是lnc-ALVE1-AS1熒光定量PCR檢測結果圖。

圖2是lnc-ALVE1-AS1在雞1號染色體上的位置示意圖。