[發明專利]一株馬克斯克魯維酵母菌及其生產β-葡萄糖苷酶的方法

有效

• 申請號: 201710879565.5
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107502563B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 樸春紅;蘇敏;于寒松;王玉華;劉俊梅;代偉長;周亞楠;陳月
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/42;C12R1/645
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生

1. 一株馬克斯克魯維酵母菌（Kluyveromyces marxianus），它的保藏編號為CGMCCNo.13907。

2.β-葡萄糖苷酶的生產方法，它包括：

1）將馬克斯克魯維酵母菌，在基礎培養基中活化3代，挑取已活化的該菌種接種到基礎培養基中，在搖床中培養，溫度為25-35℃，時間10-15h；離心，洗滌，再重懸，使菌懸液濃度調整到10⁷cfu/mL，即為β-葡萄糖苷酶發酵劑；

2）步驟1）中的β-葡萄糖苷酶發酵劑按質量百分比5-15%接種到發酵培養基上；搖床中發酵，溫度為35-37℃，轉速為100-130r/min；取發酵后的發酵液，冷凍離心15-25min，收集上清液，得到β-葡萄糖苷酶粗酶液；

3）取步驟2）中的β-葡萄糖苷酶粗酶液25-35mL，加入硫酸銨，于4℃冰箱靜置，8500-9500r/min離心15-30min，將沉淀用緩沖液復溶，透析；將酶液上樣于Sephadex G-75柱子，洗脫，收集含有β-葡萄糖苷酶的洗脫峰混合；再上樣于DEAE Cellulose52弱陰離子交換柱，洗脫，收集含有β-葡萄糖苷酶的組分，對純化酶進行再脫鹽，真空冷凍干燥，得到β-葡萄糖苷酶酶粉；

所述的馬克斯克魯維酵母菌，它的保藏編號為CGMCC No.13907。

3. 根據權利要求2所述的β-葡萄糖苷酶的生產方法，其特征在于：步驟2）中所述的發酵培養基為水分含量為80-99%的豆渣； 121℃滅菌20min。

4. 根據權利要求3所述的β-葡萄糖苷酶的生產方法，其特征在于：步驟1）中所述的基礎培養基的組份為：牛肉浸粉8g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸粉4g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氫二鉀2g/L、檸檬酸氫二銨2g/L、乙酸鈉5g/L、硫酸鎂0.2g/L、硫酸錳0.04g/L、吐溫80 1g/L、去離子水1000mL、pH5.7±0.2。

5. 根據權利要求4所述的β-葡萄糖苷酶的生產方法，其特征在于：步驟2）中所述的發酵溫度35℃，轉速120 r/min，離心20min。

6.根據權利要求5所述的β-葡萄糖苷酶的生產方法，其特征在于：步驟3）中所述的離心轉速為9000 r/min，時間為20min。