[發明專利]檢測10種呼吸道感染病原體的微流控芯片試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201710879415.4
• 申請日: 2017-09-26
• 公開（公告）號: CN107603866B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 許行尚;杰弗瑞·陳;于沛;朱滔;張蓉蓉
• 申請（專利權）人: 南京嵐煜生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 彭英

本發明提供一種檢測10種呼吸道感染病原體的微流控芯片試劑盒及其使用方法，該試劑盒采用Taqman探針熒光PCR技術與微流控芯片相結合，針對10種常見的呼吸道感染病原體進行檢測，能夠在2小時內獲得檢測結果，特異性強，靈敏度可達100copies/μL；包括進樣腔室、反應腔室以及微流控流道；反應腔室至少包括有10個，各個反應腔室相互獨立，均預置有用于擴增一種呼吸道病原體的試劑干粉，該試劑干粉包括用于擴增相應呼吸道病原體的引物、TaqMan探針；預置于各個反應腔室中的試劑干粉能夠分別擴增10種呼吸道病原體中的任意一種，所有反應腔室中的試劑干粉擴增出的呼吸道病原體能夠囊括10種呼吸道病原體。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種用于檢測10種呼吸道感染病原體的微流控芯片檢測用試劑盒及其使用方法。

背景技術

呼吸道感染是世界范圍內最常見的疾病之一，發病率在各國居民發病率總體結構中占主要地位，每年流行高峰期約有10％的居民患有呼吸道感染。呼吸道感染會導致鼻炎、流涕、鼻塞、咳嗽、輕度咽炎、全身發熱等癥狀，嚴重的會導致呼吸困難甚至死亡。急性呼吸道感染已經成為國內外兒童重要感染性疾病之一，其發病率已居兒童各類疾病的首位。引起兒童呼吸道感染的病原體主要有病毒、細菌、支原體和衣原體等，快速和準確的診斷以及適當的治療，是減少兒童住院和不必要的抗菌藥物使用的重要前提。因此，呼吸道病原體的快速檢測，對臨床早期診斷有著非常重要的意義。

微流控芯片(microfluidics)或稱芯片實驗室(Lab-on-a-Chip)是指把生物和化學等領域中所涉及的樣品制備，生物與化學反應，分離、檢測等基本操作單元或基本集成到一塊幾平方厘米(甚至更小)的芯片上，用以完成不同的生物或化學反應過程，并對其產物進行分析的一種技術。這種技術原則上適用于從核酸、蛋白質直到有機、無機小分子的各種不同類型分子的反應、分離和檢測。微流控芯片具有液體流動可控、消耗試樣和試劑極少、分析速度成十倍上百倍地提高等特點,它可以在幾分鐘甚至更短的時間內進行上百個樣品的同時分析,并且可以在線實現樣品的預處理及分析全過程。

目前市場上針對呼吸道感染病原體的檢測方法主要有熒光PCR法、免疫法和細菌培養法。熒光PCR法是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時監測，定性或定量檢測目的基因；免疫法是通過抗原抗體發生特異性結合來檢測目的蛋白；細菌培養法是把病原體細菌在特定培養基上進行培養，再對產生的細菌菌落進行觀察檢測。

普通熒光PCR檢測試劑雖然具有較好的靈敏度和特異性，但是多是針對單項或幾項病原體，想要檢測多種病原體就要采用多套不同的檢測試劑盒搭配，操作不便且成本較高；而免疫法檢測試劑雖然可以同時檢測多項病原體，但是由于免疫法檢測的是樣本中病原體引起機體產生的特異性抗體，因此存在一個較長的空窗期，并且靈敏度相對較低；而對于細菌類病原體的檢測，采用細菌培養法雖然準確率高，但是耗時較長，培養效果差，很多細菌無法培養，延誤了最佳治療時機。

發明內容

本發明針對10種常見的呼吸道感染病原體，包括肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團菌、百日咳桿菌、鼻病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、合胞病毒、副流感病毒等，提供一種用于微流控芯片檢測的試劑盒及其使用方法，以實現同時快速檢測10種呼吸道感染病原體的檢測需求。

為了實現以上目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測10種呼吸道感染病原體的微流控芯片試劑盒，包括試劑盒本體，該試劑盒本體包括進樣腔室、反應腔室以及實現進樣腔室、反應腔室連通的微流控流道；

所述反應腔室至少包括有10個，各個反應腔室相互獨立，且各反應腔室中均預置有用于擴增一種呼吸道病原體的試劑干粉，該試劑干粉包括用于擴增相應呼吸道病原體的引物、TaqMan探針；

預置于各個反應腔室中的試劑干粉能夠分別擴增如下的10種呼吸道病原體中的任意一種，同時，所有反應腔室中的試劑干粉擴增出的呼吸道病原體能夠囊括如下10種呼吸道病原體：