[發(fā)明專利]一種水稻紋枯病的生物防治方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710873554.6
• 申請日: 2017-09-25
• 公開（公告）號: CN107400682A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 章云;張貝尼
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省中日農(nóng)業(yè)環(huán)?？萍加邢薰?/a>
• 主分類號: C12P1/04
• 分類號: C12P1/04;A01N63/02;A01N43/16;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/385
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所11308
• 代理人: 范奇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水稻病蟲害的生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水稻紋枯病的生物防治方法。

背景技術(shù)

水稻紋枯病，是影響我國水稻生長的常見病害，一般情況下水稻紋枯病會致使水稻減產(chǎn)10％-20％，嚴(yán)重時往往導(dǎo)致水稻倒伏枯死，減產(chǎn)量高達(dá)到50％-60％，對我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

然而，目前防治水稻紋枯病的有效藥劑比較單一，主要是井岡霉素。由于長期使用，水稻紋枯病菌對井岡霉素產(chǎn)生了一定程度的抗藥性，單一的井岡霉素對水稻紋枯病的防效已明顯減弱，使得每年使用的次數(shù)逐漸增多，使用量也顯著增加。因此，為了提高水稻紋枯病的防效，研發(fā)高效的新型藥劑已迫在眉睫。生物防治是一種高效、安全控制水稻紋枯病的方法。近年來，國內(nèi)外專家對水稻紋枯病拮抗菌進(jìn)行了大量研究，取得了較大成果，然而，研究表明單一的生物防治效果并不理想，常常表現(xiàn)出較大的變異。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中單一的生物防治存在的問題，本發(fā)明提供了一種水稻紋枯病的生物防治方法，采用混配劑混用防治水稻紋枯病具有增效效果。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種水稻紋枯病的生物防治方法，包括以下步驟：

步驟一：制備NA固體培養(yǎng)基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸餾水溶解，定容至1L，PH調(diào)至7±0.1，分裝后121℃滅菌20min；

步驟二：制備LB液體培養(yǎng)液，在950ml去離子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，攪拌直至溶質(zhì)溶解，用5mol/LNaOH調(diào)pH至7.0，用去離子水定容至1L，在15psi高壓下蒸汽滅菌21min；

步驟三：將拮抗細(xì)菌在NA固體培養(yǎng)基上于37℃活化24h，用無菌水制成菌體懸浮液，取10mL菌體懸浮液接種到裝有100mLLB液體培養(yǎng)液的250mL錐形瓶中，在28℃的恒溫條件下以220r/min的速率震蕩培養(yǎng)48h，得到種子液；

步驟四：種子液以10％的接種量接入裝有300mLLB液體培養(yǎng)液的1000mL錐形瓶中，磁力攪拌，轉(zhuǎn)速為1000r/min，置于28℃的振蕩培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)84h，得發(fā)酵液；

步驟五：將發(fā)酵液和乙酸乙酯以質(zhì)量比1:2充分混勻萃取48h，取萃取液于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，以110r/min的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至膏狀，用無菌水溶解，配成質(zhì)量濃度為1000mg/L的發(fā)酵液提取物，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六：在無菌條件下，將發(fā)酵液提取物和質(zhì)量濃度500mg/L的井岡霉素按質(zhì)量比4:1混合均勻得混配劑；

步驟七：水稻種子用質(zhì)量濃度70％的乙醇溶液浸泡2min，然后用質(zhì)量濃度3％的次氯酸鈉水溶液浸泡30min，期間用玻璃棒攪動，無菌水沖洗3次，第3次沖洗持續(xù)10min，過夜干燥，置于鋪有兩層濕潤濾紙片的培養(yǎng)皿中，再放于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4d直至發(fā)芽，最后將發(fā)芽的水稻種子播種于田地，在水稻生長的第10、20、50和80天向水稻葉面噴灑混配劑。

優(yōu)選的，所述的拮抗細(xì)菌為拮抗細(xì)菌SU8。

優(yōu)選的，所述的拮抗細(xì)菌SU8為銅綠假單胞菌。

本發(fā)明的有益效果在于：

1)發(fā)酵提取物混配井岡霉素對水稻紋枯病菌的防治具有協(xié)同作用，能顯著增強(qiáng)井岡霉素對水稻紋枯病的防治效果，為提高井岡霉素對水稻紋枯病的防治效果提供了一定的理論依據(jù)，并為拓展拮抗細(xì)菌生物農(nóng)藥的應(yīng)用提供了一條有效途徑。

2)本發(fā)明的方法可以調(diào)控水稻植株的生長發(fā)育進(jìn)程，包含有益的細(xì)茵群落在植株生長中具有促生、抗病、抗逆等功能。根據(jù)植物微生態(tài)理論，這些細(xì)菌和宿主之間在長期的進(jìn)化過程中能夠建立互惠互利的關(guān)系。從生物間巧生互作等關(guān)系考慮，這些細(xì)菌將更有利于生物的定殖，可更好地發(fā)揮生防作用。

3)本發(fā)明采用生物防治是發(fā)展綠色水稻產(chǎn)業(yè)的重要手段，拮抗細(xì)菌是防治水稻紋枯病的重要生防微生物。從植物中尋找具有生物活性的化合物，直接將其發(fā)成為新農(nóng)藥，是目前農(nóng)藥研發(fā)的一條重要途徑。

具體實(shí)施方式

下面通過對實(shí)施例的描述，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思、技術(shù)方案有更完整、準(zhǔn)確和深入的理解。

實(shí)施例1

一種水稻紋枯病的生物防治方法，包括以下步驟：