[發明專利]一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法

有效

• 申請號: 201710873179.5
• 申請日: 2017-09-25
• 公開（公告）號: CN107494520B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 狄和雙;賀衛華;王麗華;劉忠慧;蔣珊珊;羅有文;翟曉虎;曹云;徐亞亞;田其真;趙莎莎;顏衛;卓國榮
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 泰州地益專利事務所 32108
• 代理人: 王楚云

本發明公開了一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法，屬于精液冷凍技術領域。該犬用精液冷凍稀釋劑組成成分為：Tris 0.1~1.2 g,葡萄糖0.1~2.9 g，檸檬酸0.1~1.36 g,卵黃0~20 mL，LDL 1~8 g，PCS 0~0.1 g，N,N?二甲基酰胺0~1.0 g，前列腺素0~0.1 mg，VE 0.1~1.5 g，復合VB 0.1~1.5 g，甘油0~6 mL，青霉素0~0.05 g，鏈霉素0~0.025 g，加雙蒸水至100mL。本發明可以使得精子的前向性、直線速率、鞭打頻率等指標顯著提高，犬精液的精子活率、精子膜完整性和精子DNA完整性也得到提升。

技術領域

本發明屬于精液冷凍技術領域，尤其涉及一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法。

背景技術

我國犬種資源豐富，品種繁多，其中北京犬、西施犬、沙皮犬、藏獒等品種列為世界名犬，還有通過各種途徑從國外引進的優良品種如貴賓犬、博美犬等。珍惜這些犬種資源對我國犬業健康發展至關重要。但近年來在經濟利益的驅使下，許多名貴犬種被大量無序繁殖，但都“重量不重質”，小群體近親繁育等現象導致這些犬品種混雜，良莠不齊，優良純種個體嚴重缺乏，嚴重影響了犬的性能，繁殖力降低，群體性能差異大。 利用人工授精技術結合開放式核心群育種以及現代分子育種技術等方法可以做好這些優良犬種的血統保純工作，促進我國犬業的健康持續發展。

牛羊豬等家畜的人工授精技術早已普及應用，而犬的冷凍精液技術在國內仍然處于研究階段，犬的冷凍精液稀釋劑、冷凍技術不成熟導致犬的凍精解凍后精子活力低、授精后受孕率低，例如常規的冷凍稀釋劑常常加入的卵黃、甘油成分，會抑制精子呼吸，降低精子活率。遠遠落后于國外的人工授精技術。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術中存在的缺點與不足，提供一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法。

本發明所采用的技術方案是：

一種犬用精液冷凍稀釋劑，其組成成分為：Tris 0.1~1.2 g, 葡萄糖 0.1~2.9 g，檸檬酸 0.1~1.36 g, 卵黃0-20 mL，LDL 1~8 g，PCS 0~0.1 g，N, N-二甲基酰胺0~1.0 g，前列腺素0~0.1 mg，VE 0.1~1.5 g，復合VB 0.1~1.5 g，甘油0~6 mL，青霉素0~0.05 g，鏈霉素 0~0.025 g，加雙蒸水至100mL。

根據上述冷凍稀釋劑進行精液冷凍的方法，步驟如下：

(a)采用手握按摩法采取雄犬的精液，采集后迅速檢測精液品質，精液冷凍前精液活率大于90%，密度大于1.0*108個/mL，畸形率小于5%，精子膜完整性大于85%，精子DNA完整性大于90%；

(b)先將不含有甘油的冷凍稀釋劑按1:1比例稀釋精液，采用水浴降溫的方法由室溫經過2h緩慢降溫到4℃，加入甘油，平衡2h ，然后分裝到0.25ml細管，將細管放入-70℃冰箱凍存15min，再將細管鋪平在距離液氮面2cm處熏蒸6min，放入液氮罐中保存。

(c)精液冷凍一周后將細管投入40℃的溫水中10秒后取出，檢測精液品質。

優選的，所述的一種犬用精液冷凍稀釋劑，其組成成分為：Tris 1.2 g，葡萄糖2.9 g，檸檬酸 1.36 g，卵黃 0 mL，LDL 8 g，PCS 0.1 g，N, N-二甲基酰胺 1 g，前列腺素0.1 mg，VE 1.5 g，復合VB 1.5 g，甘油5 mL ，青霉素 0.05 g，鏈霉素 0.025 g，加雙蒸水至100 mL。

上述所述的TRIS(Solarbio)為細管凍精封口粉，采購于日本東京，PCS為膽固醇硫酸脂鉀鹽，采購于揚州科能，前列腺素采購于揚州科能生物有限公司），VE采購于揚州科能生物有限公司， LDL為低密度脂蛋白，依據 Mo ussa 等所介紹的方法自制備用。