[發(fā)明專(zhuān)利]一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710873179.5
• 申請(qǐng)日: 2017-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107494520B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 狄和雙;賀衛(wèi)華;王麗華;劉忠慧;蔣珊珊;羅有文;翟曉虎;曹云;徐亞亞;田其真;趙莎莎;顏衛(wèi);卓國(guó)榮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 泰州地益專(zhuān)利事務(wù)所 32108
• 代理人: 王楚云

本發(fā)明公開(kāi)了一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法，屬于精液冷凍技術(shù)領(lǐng)域。該犬用精液冷凍稀釋劑組成成分為：Tris 0.1~1.2 g,葡萄糖0.1~2.9 g，檸檬酸0.1~1.36 g,卵黃0~20 mL，LDL 1~8 g，PCS 0~0.1 g，N,N?二甲基酰胺0~1.0 g，前列腺素0~0.1 mg，VE 0.1~1.5 g，復(fù)合VB 0.1~1.5 g，甘油0~6 mL，青霉素0~0.05 g，鏈霉素0~0.025 g，加雙蒸水至100mL。本發(fā)明可以使得精子的前向性、直線速率、鞭打頻率等指標(biāo)顯著提高，犬精液的精子活率、精子膜完整性和精子DNA完整性也得到提升。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于精液冷凍技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法。

背景技術(shù)

我國(guó)犬種資源豐富，品種繁多，其中北京犬、西施犬、沙皮犬、藏獒等品種列為世界名犬，還有通過(guò)各種途徑從國(guó)外引進(jìn)的優(yōu)良品種如貴賓犬、博美犬等。珍惜這些犬種資源對(duì)我國(guó)犬業(yè)健康發(fā)展至關(guān)重要。但近年來(lái)在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，許多名貴犬種被大量無(wú)序繁殖，但都“重量不重質(zhì)”，小群體近親繁育等現(xiàn)象導(dǎo)致這些犬品種混雜，良莠不齊，優(yōu)良純種個(gè)體嚴(yán)重缺乏，嚴(yán)重影響了犬的性能，繁殖力降低，群體性能差異大。 利用人工授精技術(shù)結(jié)合開(kāi)放式核心群育種以及現(xiàn)代分子育種技術(shù)等方法可以做好這些優(yōu)良犬種的血統(tǒng)保純工作，促進(jìn)我國(guó)犬業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。

牛羊豬等家畜的人工授精技術(shù)早已普及應(yīng)用，而犬的冷凍精液技術(shù)在國(guó)內(nèi)仍然處于研究階段，犬的冷凍精液稀釋劑、冷凍技術(shù)不成熟導(dǎo)致犬的凍精解凍后精子活力低、授精后受孕率低，例如常規(guī)的冷凍稀釋劑常常加入的卵黃、甘油成分，會(huì)抑制精子呼吸，降低精子活率。遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于國(guó)外的人工授精技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)與不足，提供一種犬用精液冷凍稀釋劑及冷凍方法。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種犬用精液冷凍稀釋劑，其組成成分為：Tris 0.1~1.2 g, 葡萄糖 0.1~2.9 g，檸檬酸 0.1~1.36 g, 卵黃0-20 mL，LDL 1~8 g，PCS 0~0.1 g，N, N-二甲基酰胺0~1.0 g，前列腺素0~0.1 mg，VE 0.1~1.5 g，復(fù)合VB 0.1~1.5 g，甘油0~6 mL，青霉素0~0.05 g，鏈霉素 0~0.025 g，加雙蒸水至100mL。

根據(jù)上述冷凍稀釋劑進(jìn)行精液冷凍的方法，步驟如下：

(a)采用手握按摩法采取雄犬的精液，采集后迅速檢測(cè)精液品質(zhì)，精液冷凍前精液活率大于90%，密度大于1.0*108個(gè)/mL，畸形率小于5%，精子膜完整性大于85%，精子DNA完整性大于90%；

(b)先將不含有甘油的冷凍稀釋劑按1:1比例稀釋精液，采用水浴降溫的方法由室溫經(jīng)過(guò)2h緩慢降溫到4℃，加入甘油，平衡2h ，然后分裝到0.25ml細(xì)管，將細(xì)管放入-70℃冰箱凍存15min，再將細(xì)管鋪平在距離液氮面2cm處熏蒸6min，放入液氮罐中保存。

(c)精液冷凍一周后將細(xì)管投入40℃的溫水中10秒后取出，檢測(cè)精液品質(zhì)。

優(yōu)選的，所述的一種犬用精液冷凍稀釋劑，其組成成分為：Tris 1.2 g，葡萄糖2.9 g，檸檬酸 1.36 g，卵黃 0 mL，LDL 8 g，PCS 0.1 g，N, N-二甲基酰胺 1 g，前列腺素0.1 mg，VE 1.5 g，復(fù)合VB 1.5 g，甘油5 mL ，青霉素 0.05 g，鏈霉素 0.025 g，加雙蒸水至100 mL。

上述所述的TRIS(Solarbio)為細(xì)管凍精封口粉，采購(gòu)于日本東京，PCS為膽固醇硫酸脂鉀鹽，采購(gòu)于揚(yáng)州科能，前列腺素采購(gòu)于揚(yáng)州科能生物有限公司），VE采購(gòu)于揚(yáng)州科能生物有限公司， LDL為低密度脂蛋白，依據(jù) Mo ussa 等所介紹的方法自制備用。