[發明專利]一種水稻紋枯病的生物防控技術

在審

• 申請號: 201710873100.9
• 申請日: 2017-09-25
• 公開（公告）號: CN107400681A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 章云;張貝尼
• 申請（專利權）人: 安徽省中日農業環保科技有限公司
• 主分類號: C12P1/04
• 分類號: C12P1/04;A01N63/02;A01N43/16;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/385
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 范奇

技術領域

本發明涉及水稻病蟲害的生物防治技術領域，具體涉及一種水稻紋枯病的生物防控技術。

背景技術

水稻紋枯病，是影響我國水稻生長的常見病害，一般情況下水稻紋枯病會致使水稻減產10％-20％，嚴重時往往導致水稻倒伏枯死，減產量高達到50％-60％，對我國農業生產造成了巨大的經濟損失。

然而，目前防治水稻紋枯病的有效藥劑比較單一，主要是井岡霉素。由于長期使用，水稻紋枯病菌對井岡霉素產生了一定程度的抗藥性，單一的井岡霉素對水稻紋枯病的防效已明顯減弱，使得每年使用的次數逐漸增多，使用量也顯著增加。因此，為了提高水稻紋枯病的防效，研發高效的新型藥劑已迫在眉睫。生物防治是一種高效、安全控制水稻紋枯病的方法。近年來，國內外專家對水稻紋枯病拮抗菌進行了大量研究，取得了較大成果，然而，研究表明單一的生物防治效果并不理想，常常表現出較大的變異。

發明內容

為了解決現有技術中單一的生物防治存在的問題，本發明提供了一種水稻紋枯病的生物防控技術，采用混配劑混用防治水稻紋枯病具有增效效果。

本發明采用以下技術方案：

一種水稻紋枯病的生物防控技術，包括以下步驟：

步驟一：制備NA固體培養基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸餾水溶解，定容至1L，PH調至7±0.1，分裝后121℃滅菌20min；

步驟二：制備LB液體培養液，在950ml去離子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，攪拌直至溶質溶解，用5mol/LNaOH調pH至7.0，用去離子水定容至1L，在15psi高壓下蒸汽滅菌21min；

步驟三：將拮抗細菌在NA固體培養基上于37℃活化24h，用無菌水制成菌體懸浮液，取10mL菌體懸浮液接種到裝有100mLLB液體培養液的250mL錐形瓶中，在28℃的恒溫條件下以220r/min的速率震蕩培養48h，得到種子液；

步驟四：種子液以10％的接種量接入裝有300mLLB液體培養液的1000mL錐形瓶中，磁力攪拌，轉速為1000r/min，置于28℃的振蕩培養箱中連續培養84h，得發酵液；

步驟五：將發酵液和乙酸乙酯以質量比1:2充分混勻萃取48h，取萃取液于40℃旋轉蒸發儀中，以110r/min的轉速旋轉蒸發至膏狀，用無菌水溶解，配成質量濃度為1000mg/L的發酵液提取物，置于4℃冰箱保存備用；

步驟六：在無菌條件下，將發酵液提取物和質量濃度500mg/L的井岡霉素按質量比4:1混合均勻得混配劑；

步驟七：稱取鴨糞粉末500g，按質量比1:4加入2000mL無水乙醇，50℃浸提24h，抽濾，濾渣用2000mL無水乙醇復提取1次，合并濾液，用旋轉蒸發儀減壓濃縮至浸膏狀，得粗提物于4℃保存備用；

步驟八：稱取10g粗提物，用有機溶劑溶解后裝入500mL容器中，用乙酸乙酯萃取4次，每次100mL，合并有機相，減壓濃縮至浸膏狀，制得乙酸乙酯組分，再用丙酮配制成80mg·mL^-1，既得鴨糞提取物藥液；

步驟九：水稻種子用質量濃度70％的乙醇溶液浸泡2min，然后用質量濃度3％的次氯酸鈉水溶液浸泡30min，期間用玻璃棒攪動，無菌水沖洗3次，第3次沖洗持續10min，過夜干燥，置于鋪有兩層濕潤濾紙片的培養皿中，再放于37℃恒溫培養箱培養4d直至發芽，最后將發芽的水稻種子播種于田地，在水稻生長的第10、20、50和80天向水稻葉面噴灑混配劑，并在水稻生長的第20天向水稻葉面噴灑鴨糞提取物藥液。

優選的，所述的拮抗細菌為拮抗細菌SU8。

優選的，所述的拮抗細菌SU8為銅綠假單胞菌。

本發明的有益效果在于：

1)發酵提取物混配井岡霉素對水稻紋枯病菌的防治具有協同作用，能顯著增強井岡霉素對水稻紋枯病的防治效果，為提高井岡霉素對水稻紋枯病的防治效果提供了一定的理論依據，并為拓展拮抗細菌生物農藥的應用提供了一條有效途徑。

2)鴨糞提取物對水稻紋枯病菌有抑制作用，其中鴨糞乙醇提取物對水稻紋枯病原菌的最高抑制率可達80％以上。

3)本發明的方法可以調控水稻植株的生長發育進程，包含有益的細茵群落在植株生長中具有促生、抗病、抗逆等功能。根據植物微生態理論，這些細菌和宿主之間在長期的進化過程中能夠建立互惠互利的關系。從生物間巧生互作等關系考慮，這些細菌將更有利于生物的定殖，可更好地發揮生防作用。