[發明專利]一種防治水稻稻瘟病的方法

在審

• 申請號: 201710873053.8
• 申請日: 2017-09-25
• 公開（公告）號: CN107517788A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 章云;張貝尼
• 申請（專利權）人: 安徽省中日農業環保科技有限公司
• 主分類號: A01G13/00
• 分類號: A01G13/00;A01N63/00;A01N59/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 范奇

1.一種防治水稻稻瘟病的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：選取健康水稻葉片，剪成5cm的葉段，放入裝有質量濃度75％乙醇的三角瓶中振蕩洗滌2次后倒掉乙醇，加入無菌水浸泡30min后梯度稀釋，得梯度稀釋液；

步驟二：制備NA固體培養基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸餾水溶解，定容至1L，PH調至7±0.1，分裝后121℃滅菌20min；

步驟三：吸取梯度稀釋液涂布于NA固體培養基上，待吹干后，在30℃的恒溫培養箱中倒置培養48h，挑取單菌落，在NA固體培養基上梯度劃線再次獲得單菌落，將獲得的單菌落保存于NA固體培養基試管斜面備用；

步驟四：制備PDA培養基，將馬鈴薯去皮洗凈，稱取200g馬鈴薯并切成小塊，加水煮沸20-30分鐘，用八層紗布過濾，加入20g瓊脂，繼續加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖20克，攪拌均勻，稍冷卻后再補足水分至1000毫升定容，115℃滅菌20分鐘；

步驟五：NA固體培養基試管斜面上挑取單菌落，劃線接種于PDA培養基上，置于25℃恒溫光照條件下培養6d后，用接種環挑取菌落至無菌水中，配成孢子液；

步驟六：水稻種子用質量濃度15％的H₂O₂消毒20min，浸種48h，期間用蒸餾水換水2-3次，芽露白后在30℃下光照培養4-5d，然后選取生長一致的幼苗移栽于田地，在幼苗生長的第10、20、50和80天向水稻葉面噴灑孢子液，并在幼苗長到第20天時進行加硅處理，即在Hoagland營養液中加入2.0mmol·L^-1K₂SO₃溶液，并用2mol·L^-1HCl調節pH至5.6，噴灑于水稻葉面。

2.根據權利要求1所述的一種防治水稻稻瘟病的方法，其特征在于：步驟一中所述的梯度稀釋共稀釋2次，每次稀釋2倍。

3.根據權利要求1所述的一種防治水稻稻瘟病的方法，其特征在于：步驟五中所述的孢子液濃度為10⁶－10⁷CFU/mL。

4.根據權利要求1所述的一種防治水稻稻瘟病的方法，其特征在于：所述的單菌落為芽胞桿菌。