[發(fā)明專利]一種含有結(jié)合核酸的磁珠在生物樣品保存液的制備和運(yùn)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710871901.1
• 申請(qǐng)日: 2017-09-25
• 公開（公告）號(hào): CN108220281A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王亮;李燕;薛緯瑩;王磊;鄭春陽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津強(qiáng)微特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種含有結(jié)合核酸的磁珠在生物樣品保存液及其制備與應(yīng)用，包括如下組分和含量：Tris?HCl為10–200mmol/L，SDS 0.2?1%（w/v），EDTA 300?800mmol/L，氯化鈉500?750mmol/L，蛋白酶K 50to500μg/mL，1?5×10⁸顆/mL結(jié)合DNA的磁珠，pH范圍在6?10之間。本發(fā)明的唾液保存液用于保存在生物樣品時(shí),如唾液和尿液,能夠在室溫條件下運(yùn)輸，或者長(zhǎng)期保存生物樣本中核酸，適用于生物樣本在各采集地之間運(yùn)輸過程和長(zhǎng)期的樣本保存，便于基因檢測(cè)及相關(guān)科學(xué)臨床研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種含有結(jié)合核酸的磁珠在生物樣品保存液的制備和運(yùn)用。

背景技術(shù)

歸功于技術(shù)的進(jìn)步，尤其是2006 年第二代測(cè)序儀誕生，通量的急劇提升，成本價(jià)格更是以超摩爾定律下降：個(gè)人基因組測(cè)序費(fèi)用從2001年的1億美元下降至2014年的1000美元以下。現(xiàn)如今基因測(cè)序技術(shù)正進(jìn)入普通人的生活中，通過一口唾液，就能知道你的性格、血型、各種疾病的可能性或者祖宗從哪來的,現(xiàn)在基因測(cè)序離我們可謂越來越近。

基因測(cè)序中，樣本的獲得正獲得越來越多的重視。生物樣本，包括但不僅限于唾液，尿液，含有脫落細(xì)胞或者游離的DNA片段，比起提取血液中的DNA有以下優(yōu)點(diǎn)：a，簡(jiǎn)便易行，無穿刺； b，不需要醫(yī)用無菌設(shè)備，如配備注射器、消毒用具等等，也不用培訓(xùn)專業(yè)的抽血人員。

唾液或者尿液中還含有多種微生物和脫落的細(xì)胞，它們?cè)谄平夂髸?huì)釋放出多種酶，降解唾液或者尿液中的DNA樣本，因此，在運(yùn)輸和保存過程中，保持原有基因組DNA完整和抑制微生物的生長(zhǎng)，對(duì)保存DNA原始信息和下游應(yīng)用至關(guān)重要。

DNA提取方法繁多，包括傳統(tǒng)的酚-氯仿法、濾膜離心柱法、鹽析法等。磁珠法不需離心，操作簡(jiǎn)單，是已成為目前新興的DNA提取技術(shù)。在磁場(chǎng)作用下，DNA被吸附到磁性顆粒的特殊處理表面，而蛋白等分子不被吸附而留在溶液中。除去含有雜質(zhì)的溶液后，磁珠上吸附的高純度的DNA并用可相應(yīng)的洗脫液洗脫。

吸附DNA的磁珠以往都用于核酸的純化，普遍認(rèn)為需要鹽酸胍高鹽。有研究表明，當(dāng)胍鹽裂解液稀釋度降低到60%以下時(shí)，樣品DNA回收效率明顯降低。而且胍鹽成分不穩(wěn)定，尤其易受室溫、季節(jié)溫度影響，不利于運(yùn)輸。本發(fā)明將磁珠用于生物保存液，譬如唾液和尿液的保存液中，不需要胍鹽成分，就可以吸附DNA，有效地把保存液和核酸提取連接在一起，減少了樣品損失，且避免了操作過程中交叉污染。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種含有結(jié)合核酸的磁珠在生物樣品保存液的制備和運(yùn)用。生物樣品可以是，但不僅限于，唾液和尿液。在保存液中加入結(jié)合核酸的磁珠，磁珠是核酸提取的重要組分，有機(jī)地把核酸的保存和提取結(jié)合在一起。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:

一種含有結(jié)合核酸的磁珠的保存液，包括如下組分和含量：Tris HCl為50 mmol/L，SDS0.5%（w/v）， EDTA 600 mmol /L，氯化鈉500mmol/L，蛋白酶 K 250 μg/mL， 3 ×10⁸/mL結(jié)合DNA的磁珠，pH范圍在8。

在本發(fā)明技術(shù)方案中，發(fā)明人創(chuàng)造性地使用特定量的SDS 0.5%和蛋白酶 K進(jìn)行核酸提取。不僅可以充分裂解細(xì)胞，消化蛋白后使核酸充分釋放，而且磁珠可以有效吸附核酸，使蛋白和其他雜質(zhì)留在液相中實(shí)施有效地分離。

所述磁珠可以為微米磁珠或者納米磁珠。磁珠和裂解液可以按照一定比例范圍相混合。作為優(yōu)選，磁珠的濃度3 ×10⁸/mL。