[發明專利]一種熒光測定DNA連接酶活性的方法在審
| 申請號： | 201710870827.1 | 申請日： | 2017-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN108220386A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發明（設計）人： | 王亮;鄭春陽 | 申請（專利權）人： | 天津強微特生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/25 | 分類號： | C12Q1/25 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 300384 天津市南開*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 聯體 放射性同位素 分子生物學技術 熔點 硫代黃素 熒光測定 熒光基團 電泳膠 化學物 環結構 鳥嘌呤 小片段 熒光 構象 原莖 合成 大片 檢測 研究 | ||
1.一種熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于， DNA連接酶把小片段的DNA連接為大片段的DNA時，DNA片段的熔點（Tm值）發生了變化，改變了原莖環結構的DNA構象，形成G-四聯體（鳥嘌呤-四聯體），G-四聯體可結合硫代黃素T后在490 nm處發出熒光，最后以熒光值為基礎推導出DNA連接酶的活力。
2.如權利要求1所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于，起始的DNA含有一個莖環結構, 當莖環結構的結構被打破，形成G-四聯體。
3.如權利要求2所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于起始的DNA含有一個莖環結構，當莖環結構的結構被打破，形成G-四聯體可結合硫代黃素T后在490 nm處發出熒光。
4.如權利要求1所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于，當兩段DNA被DNA連接酶催化下，形成一個較長的DNA片段可以和莖環結構互補結合，并打開莖環結構，形成G-四聯體。
5.如權利要求4所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于，不同的化學物質可以結合G-四聯體并發出熒光，包括但不限于硫代黃素T、溴化乙錠等，所采用的熒光染料是硫代黃素T，其結合DNA后，才在特定波長490nm產生熒光的燃料。
6.如權利要求4所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于，所采用的莖環結構DNA的3‘端含有d(G3+N1-7G3+N1-7G3+N1-7G3+)，其中G是鳥嘌呤，N是任何一種核苷酸。
7.如權利要求1所述的熒光測定DNA連接酶活性的方法，其特征在于，兩個小片段DNA均和莖環結構的單鏈DNA互補結合，形成一個可以被DNA連接酶作用并連接的缺刻結構。
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