[發明專利]一種人Y染色體標簽位點sY1291的檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 201710869725.8
• 申請日: 2017-09-23
• 公開（公告）號: CN107502668B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 趙書民;彭朝敏;周巍;金云舟
• 申請（專利權）人: 上海五色石醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 杭州創信知識產權代理有限公司 33383
• 代理人: 蘭玉華

1.一種人Y染色體標簽位點sY1291的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法用于非診斷目的，具體步驟為：

(1)確定sY1291位點PCR引物的擴增區域，其策略是要避開歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網聯合出版的Y染色體微缺失2013版分子診斷操作指南中推薦的sY1291位點PCR引物的擴增區域，在歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網推薦檢測區域臨近處的大片段重復區域設計新的特異性PCR擴增引物；所述檢測區域I位于歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網推薦sY1291位點檢測區域上游38bp處；故選擇的檢測區域包括：I區：ChrY:25,504,754-25,505,032，II區：ChrY:25,207,966-25,208,244，III區：ChrY:26,841,711-26,841,989，IV區：ChrY:27,120,413-27,120,691；I區與II區位于歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網推薦sY1291位點檢測區域的上游，III區與IV區位于歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網推薦sY1291位點檢測區域的下游；I區的5’端距歐洲男科學協會/歐洲分子遺傳實驗質控協作網推薦sY1291位點檢測區域3’端38bp；

(2)設計PCR擴增引物，核苷酸序列為SEQ ID No.1與SEQ ID No.2所示，該PCR擴增引物覆蓋Yq11.223-Yq11.23區域的I區、II區、III區、IV區；

(3)利用PCR擴增引物，對人Y染色體標簽位點sY1291進行檢測,分為3種情況：

(a)采用DNA聚合酶進行PCR擴增，PCR擴增產物采用1.0％-2.0％瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，無PCR擴增目標產物為樣本sY1291位點缺失，有PCR擴增目標產物者為sY1291未缺失；

(b)對SEQ ID No.1所示核苷酸序列5’端或SEQ ID No.2所示核苷酸序列5’端進行熒光素標記，采用DNA聚合酶進行PCR擴增，PCR產物采用3500Dx或同類型基因測序儀進行毛細管電泳片段分析，出現PCR擴增目標產物熒光峰者為sY1291位點未缺失，未出現PCR擴增目標產物熒光峰者為sY1291位點缺失；

(c)設計熒光標記探針，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，采用實時熒光PCR方法進行檢測，出現目標片段PCR擴增曲線者為sY1291位點未缺失，未出現目標片段PCR擴增曲線者為sY1291位點缺失。

2.根據權利要求1所述的人Y染色體標簽位點sY1291的檢測方法，其特征在于，采用PCR擴增引物：SEQ ID No.1與SEQ ID No.2所擴增人Yq11.223-Yq11.23區域I區、II區、III區與IV區的序列同源性＞99％。

3.根據權利要求1所述的人Y染色體標簽位點sY1291的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中的情況(a)與情況(b)的反應體系中，PCR擴增引物SEQ ID No.1與SEQ ID No.2的工作濃度為50nmol/L至300nmol/L；情況(c)的反應體系中，PCR擴增引物SEQ ID No.1與SEQ IDNo.2的工作濃度為300nmol/L至500nmol/L，探針SEQ ID No.3的工作濃度為150nmol/L至250nmol/L。

4.用于人Y染色體標簽位點sY1291的檢測的PCR擴增引物，其特征在于，核苷酸序列為SEQ ID No.1與SEQ ID No.2所示。

5.如權利要求4所述的用于人Y染色體標簽位點sY1291的檢測的PCR擴增引物，其特征在于，還包括用于人Y染色體標簽位點sY1291檢測的探針，其核苷酸序列為SEQ ID No.3所示。

6.如權利要求1-3任一所述的人Y染色體標簽位點sY1291的檢測方法在人AZF微缺失檢測中的應用，其特征在于，用于非診斷目的。