[發明專利]一種特立帕肽的制備方法

有效

• 申請號: 201710866945.5
• 申請日: 2017-09-22
• 公開（公告）號: CN107501408B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 高劍;李元波;王艷峰;葉鑫發;余昊;楊柱柱;周芯宇;何曉
• 申請（專利權）人: 揚子江藥業集團四川海蓉藥業有限公司;四川海匯藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/635
• 分類號: C07K14/635;C07K1/10;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種特立帕肽的固相合成方法，其特征在于：

所述特立帕肽的氨基酸序列為：

H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH；

所述方法包括如下步驟：

（1）在活化劑的存在下，樹脂固相載體和Fmoc-Phe-OH偶聯反應，得到Fmoc-Phe-樹脂；所述樹脂固相載體為2-CTC樹脂；

（2）通過固相合成法，在縮合劑存下在，按特立帕肽主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護的氨基酸得到全肽樹脂，且每偶聯上一個具有N端Fmoc保護的氨基酸后，采用脫保護劑脫除Fmoc基團，再偶聯下一個具有N端Fmoc保護的氨基酸；

其中，在連接第32號氨基酸時，氨基酸縮合的縮合劑為COMU，其余的縮合劑為DIC/Cl-HOBT、TBTU/HOBT/DIEA、TBTU/Cl-HOBt/DIEA組合中的一種或多種；

所述的脫保護劑為哌啶/Cl-HOBt的DMF溶液；

（3）采用含有PhSMe/PhOH/EDT體系的裂解液裂解2小時，將肽鏈從肽樹脂上脫下，經過初步純化、精制即得特立帕肽。

2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：所述步驟（2）包括如下步驟：

a. 將Fmoc-Phe-樹脂在脫保護劑中反應30min，脫除Fmoc基團，得到H-Phe-樹脂；

b. 在縮合劑存在下，H-Phe-樹脂與Fmoc-Asn(Trt)-OH反應2h，偶聯得到Fmoc-Asn(Trt)-Phe-樹脂；

c. 重復a、b步驟，按照特立帕肽主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護的氨基酸。

3.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：步驟（1）所述反應的時間是1h。

4.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：步驟（1）中所述的活化劑為DIEA、TEA或者DBU，活化劑與Fmoc-Phe-OH的摩爾比范圍為(4~8):1。

5.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于：所述活化劑與Fmoc-Phe-OH的摩爾比為6:1。

6.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特征在于：步驟（1）中樹脂固相載體與Fmoc-Phe-OH的摩爾比為（1~4）：1。

7.根據權利要求6所述的合成方法，其特征在于：步驟（1）中樹脂固相載體與Fmoc-Phe-OH的摩爾比為2.8:1。

8.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：步驟（2）中，TBTU/HOBT/DIEA或TBTU/Cl-HOBT/DIEA中三種化合物的摩爾比為1:1:1。

9.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：步驟（2）中，縮合劑中Cl-HOBT或HOBT或COMU與步驟（1）中樹脂固相載體的摩爾比為（1~4）:1；每個具有N端Fmoc保護的氨基酸與步驟（1）中樹脂固相載體的摩爾比為1：（1~4）。

10.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于：步驟（2）中所述的哌啶、Cl-HOBT、DMF體積比為1:1:8；所述脫保護劑與樹脂固相載體的體積摩爾比為100ml：（5~20）mmol。

11.根據權利要求10所述的合成方法，其特征在于：所述脫保護劑與樹脂固相載體的體積摩爾比為100ml：7mmol。