[發明專利]一種食品中酪氨酸的檢測方法

在審

• 申請號: 201710865656.3
• 申請日: 2017-09-22
• 公開（公告）號: CN107643349A
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發明（設計）人: 秦俊蓮;吳建明;陳智勇;鄭家概;陳良開;嚴藝書;楊逸菲
• 申請（專利權）人: 廣東中測食品化妝品安全評價中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/86;G01N30/74
• 代理公司: 北京高沃律師事務所11569
• 代理人: 劉奇

技術領域

本發明涉及食品中氨基酸檢測技術領域，特別涉及一種食品中酪氨酸的檢測方法。

背景技術

氨基酸是構成生物體蛋白的最基本物質，也是生物體內活性肽、酶和其他一些生物活性分子的重要組成成分，與生命活動有著密切的關系。食品中含有豐富的氨基酸，為人體所需提供了不可或缺的營養成分。

目前，檢測氨基酸的常用方法是高效液相色譜法，高效液相色譜法是利用衍生化試劑將熒光基團加在氨基酸的氨基上，然后通過熒光和紫外檢測器進行檢測，如中國專利CN104678044A公開了利用反相高效液相色譜檢測茶葉中游離氨基酸的方法；中國專利CN 104181251 A公開了一種HPLC檢測胱氨酸中酪氨酸含量的方法，但是這些方法存在靈敏度低、衍生劑昂貴、檢測結果不準確的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種食品中酪氨酸的檢測方法，提高檢測結果的準確性和靈敏度。

本發明提供了一種食品中酪氨酸的檢測方法，包括以下步驟：

(1)食品經無機酸浸提后，固液分離得到濾液；

(2)將所述步驟(1)得到的濾液依次進行調節pH值為中性和稀釋，得到稀釋液；

(3)在避光條件下，將所述步驟(2)得到的稀釋液依次與丹磺酰氯進行衍生化反應和有機濾膜過濾，得到待測液，所述有機濾膜的孔徑為0.45μm；

(4)將所述步驟(3)得到的待測液進行高效液相色譜分析，以保留時間定性，用外標法以標準方程計算得到食品中酪氨酸的含量，所述標準方程是以酪氨酸質量濃度為自變量、峰面積為因變量的方程；

所述高效液相色譜分析的色譜條件為：

分析柱：C-18柱；

流動相：有機相A:乙腈；水相B：乙酸鈉緩沖液；

流速：1mL/min；

洗脫方式：梯度洗脫，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；

檢測波長：252nm；

檢測溫度：40℃；

進樣體積：20μL；

檢測時間：35min；

檢測器：二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

優選地，所述步驟(1)中無機酸的濃度為0.1～1mol/L，所述食品的質量與無機酸的體積比為1g：10～15mL。

優選地，所述步驟(1)中浸提的時間為20～60min。

優選地，所述步驟(2)中調節pH值使用的溶液為碳酸鈉緩沖液，所述碳酸鈉緩沖液的pH值為9.5。

優選地，所述步驟(3)中稀釋液中的酪氨酸與丹磺酰氯的質量比為1:1～1.1。

優選地，所述步驟(3)中衍生化反應的時間為2～4h。

優選地，所述步驟(4)中乙酸鈉緩沖液的pH值為4.2。

優選地，所述標準方程的測定包括以下步驟：

(a)配制包含酪氨酸標準樣品的待測溶液；

(b)將所述步驟(a)得到的待測溶液與丹磺酰氯進行衍生化反應，得到待測樣品；

(c)將所述步驟(b)得到的待測樣品進行高效液相色譜分析，得到待測樣品的色譜圖，所述高效液相色譜分析的色譜條件為：

分析柱：C-18柱；

流動相：有機相A:乙腈；水相B：乙酸鈉緩沖液；

流速：1mL/min；

洗脫方式：梯度洗脫，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；

檢測波長：252nm；

檢測溫度：40℃；

進樣體積：20μL；

檢測時間：35min；

檢測器：二極管陣列檢測器或紫外檢測器；

以酪氨酸質量濃度為自變量、峰面積為因變量，得到酪氨酸的標準方程。

優選地，所述步驟(a)中待測溶液中酪氨酸的濃度為0.5～10.0μg/mL。