[發(fā)明專利]一種用于顯微注射的蚊卵處理方法

在審

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• 申請日: 2017-09-22
• 公開（公告）號: CN107517935A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權）人: 廣州威佰昆生物科技有限公司
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙)44365
• 代理人: 謝偉

技術領域

本發(fā)明屬于病蟲防害領域，具體地是涉及一種用于顯微注射的蚊卵處理方法。

背景技術

現(xiàn)有的收集蚊卵的方法：用吸蚊器收集6-10只已吸足血液的雌蚊，并將其放入到帶有濕潤棉花和濾紙的離心管中，放到黑暗的養(yǎng)蚊環(huán)境中產卵60-90min。

現(xiàn)有的蚊卵處理方法是：收集上述蚊卵，在解剖鏡下用毛筆將注射蚊卵排序，盡量挑選出灰白色的蚊卵，所有蚊卵的尾部必須朝向相同，分別排列注射供體和受體；排列完成后將帶有排列好蚊卵的厚濾紙反轉貼在有雙面膠的玻片上，并輕輕按壓，使蚊卵粘在雙面膠上。將蚊卵在室溫下干燥1min左右。

現(xiàn)有的注射后蚊卵處理方法：顯微注射完畢，用毛筆輕輕挑取注射過的受體蚊卵，將它們放置在底部墊有濕潤棉花的濾紙中，放入27℃溫度、80％相對濕度的環(huán)境中。7d后，取出帶有蚊卵的濾紙，放入滴有孵化液的純水中。定時觀察，發(fā)現(xiàn)有幼蟲孵化，立即將幼蟲挑出放入加有少量食物的純水中。

采用上述方法處理蚊卵，不同環(huán)境不同溫濕度，很容易造成蚊卵處理不當，失水過少或過多，按壓力度過小或過大。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種用于顯微注射的蚊卵處理方法，通過該方法，蚊卵的孵化率以及感染率都得以較大程度的提高。

一種用于顯微注射的蚊卵處理方法，包括以下步驟，

(1)收集蚊卵；

(2)保持注射環(huán)境室溫為20±1℃；先準備好粘著有雙面膠的玻片，將收集到的新鮮蚊卵按照頭尾一致順序排列在厚濾紙上，翻轉粘著雙面膠的玻片，將排列好的蚊卵轉移到雙面膠上，用鑷子的背部輕輕滑過玻片，從而使蚊卵能夠粘著在雙面膠上，將蚊卵放置在解剖鏡燈光下，干燥30±2s，隨后立即用水飽和的油覆蓋蚊卵，防止蚊卵進一步干燥失水；

(3)進行顯微注射，完畢，挑去供體蚊卵以及個別沒有進行注射的受體蚊卵，將承載所述雙面膠的玻片置于27±1℃溫度、80％相對濕度的環(huán)境下1±0.1h；

(4)用毛筆輕輕挑取蚊卵，并將它們放置在底部墊有濕潤棉花的濾紙中，移回27±1℃溫度、80±1％相對濕度的環(huán)境中；

(5)注射的蚊卵放置7±1d后，小心取出盛有蚊卵的濾紙，有蚊卵的一面向下，放在一個孵化液：純水1:9-11的孵化杯里進行孵化，小心用擦鏡紙覆蓋飄在水面上的蚊卵，定時觀察孵化杯，發(fā)現(xiàn)有幼蟲孵化，立即將幼蟲挑出放入加有少量食物的清水中。

優(yōu)選地，步驟1中：將15±1只腹部明顯膨大的產卵期雌蚊，在黑暗養(yǎng)蚊環(huán)境下產卵45-60min，收集到蚊卵。

優(yōu)選地，步驟5中孵化時間為2-3周。

優(yōu)選地，步驟2中用鑷子的背部輕輕滑過承載雙面膠的玻片，從而使蚊卵能夠順利粘著在雙面膠上。

優(yōu)選地，所述孵化液與純水的比例為1:10。

本發(fā)明對蚊卵的按壓力度和干燥程度進行了明確的標識，有效的穩(wěn)定了蚊卵狀態(tài)，對后續(xù)顯微注射的成功提供了很大的可能性。

顯微注射后的蚊卵特別脆弱，本發(fā)明先將其置于適宜環(huán)境下恢復1h，使其傷口盡量復原；蚊卵孵化時精確孵化液配比，保持厭氧孵化環(huán)境；蚊卵經顯微注射胞漿內容物有改變，致使其孵化可能要比普通蚊卵長數(shù)倍，故后續(xù)需要跟進觀察孵化情況。

本發(fā)明通過一系列的優(yōu)化，注射后蚊卵孵化率由現(xiàn)有的2％-8％提高到10％-50％，感染率由現(xiàn)有的30％-50％提高到50％-80％。

具體實施方式

為了便于理解本發(fā)明，下面將對本發(fā)明進行更全面的描述。本發(fā)明可以以許多不同的形式來實現(xiàn)，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使對本發(fā)明的公開內容的理解更加透徹全面。

除非另有定義，本發(fā)明所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發(fā)明的技術領域的技術人員通常理解的含義相同。本發(fā)明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明所使用的術語“和/或”包括一個或多個相關的所列項目的任意的和所有的組合。

實施例1：

本實施例所述用于顯微注射的蚊卵處理方法，包括以下步驟，

(1)收集15只腹部明顯膨大的產卵期雌蚊，在黑暗養(yǎng)蚊環(huán)境下產卵45-60min，收集到蚊卵，保證了蚊卵的新鮮度和同步性；