[發(fā)明專利]一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法

有效

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• 申請日: 2017-09-21
• 公開（公告）號: CN107589203B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設計）人: 張旭;高寶昌;田媛;石雨;崔寶玉
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院大慶分院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙) 23209
• 代理人: 張月

1.一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于該方法步驟如下：

一、確定高效液相色譜條件：所述高效液相色譜條件為：

C18反相柱：4.6×150mm，5μm；柱溫：40℃；檢測波長：220nm；洗脫方式：等度洗脫；流動相：甲醇:0.1％甲酸＝80:20；流速：1mL/min；進樣量：20μL；

二、配制混合標準品溶液：配制同時含有相同質(zhì)量濃度的三種大麻酚類化合物CBD、CBN、THC且質(zhì)量濃度依次為0.05μg/mL、0.5μg/mL、2μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的混合標準品溶液；

三、確定線性回歸方程：將步驟二配制的各濃度混合標準品溶液依次采用步驟一高效液相色譜條件進行檢測，以保留時間定性，根據(jù)各濃度所測峰面積的大小與其濃度的對應關系繪制標準曲線，并分別確定三種大麻酚類化合物的線性回歸方程，所述三種大麻酚類化合物的線性回歸方程為：

CBD：Y＝74725X+38049，n＝8，R²＝0.9992，X的適用范圍：0.05-80μg/mL；

CBN：Y＝116969X+24626，n＝7，R²＝0.9995，X的適用范圍：0.05-60μg/mL；

THC：Y＝72297X+21790，n＝7，R²＝0.9992，X的適用范圍：0.05-60μg/mL；

其中：Y為大麻酚類化合物所對應的峰面積，X為大麻酚類化合物的質(zhì)量濃度，n為繪制標準曲線時的不同混合標準品濃度取值個數(shù)，R²為線性相關性系數(shù)；

四、制備固相萃取預處理樣品：將漢麻樣品進行干燥粉碎處理，取漢麻樣品粉末于離心管并加入甲醇，采用超聲協(xié)助萃取漢麻樣品粉末中的大麻酚類化合物；離心處理萃取液并取上清液以甲醇定容，得到固相萃取預處理樣品；

五、固相萃取：采用保留干擾物的固相萃取模式，將步驟四得到的固相萃取預處理樣品加入C18/500mg固相小柱，流動相為甲醇，流速1mL/min，壓力為0.1MPa，等度洗脫，收集流出液；用少量色譜級甲醇對所述固相小柱進行淋洗，收集流出液；

六、高效液相色譜檢測：將步驟五收集的流出液混合并以甲醇重新定容，膜過濾后采用步驟一高效液相色譜條件進行檢測，測得樣品中各組分的峰面積，以保留時間定性，根據(jù)步驟三確定的線性回歸方程定量，計算樣品中三種大麻酚類化合物CBD、CBN、THC的濃度，由此計算出漢麻樣品中三種大麻酚類化合物CBD、CBN、THC的含量。

2.根據(jù)權利要求1所述一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于步驟二所述不同質(zhì)量濃度混合標準品溶液的配制方法是從同時含有CBD、CBN、THC且質(zhì)量濃度均為100μg/mL的混合標準品母液中依次取50μL、50μL、40μL、100μL、200μL、400μL、600μL、800μL于100mL、10mL、2mL、1mL、1mL、1mL、1mL、1mL容量瓶并以甲醇定容。

3.根據(jù)權利要求2所述一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于所述混合標準品母液的配制方法是分別取0.5mL質(zhì)量濃度均為1mg/mL的CBD、CBN、THC標準品溶液于5mL容量瓶并以甲醇定容。

4.根據(jù)權利要求1-3任一所述一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于步驟三所述保留時間為：CBD：8.3min，CBN：14.9min，THC：18.6min。

5.根據(jù)權利要求4所述一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于步驟四所述漢麻樣品為漢麻葉，所述干燥粉碎處理是將漢麻葉置于鼓風干燥箱中40℃烘干6小時，取適量烘干后的漢麻葉于粉碎機中粉碎至末。

6.根據(jù)權利要求5所述一種利用SPE-HPLC同時檢測漢麻中三種大麻酚類化合物的方法，其特征在于步驟四所述超聲協(xié)助萃取是精取漢麻葉粉末0.1g于10ml離心管中，加入6ml甲醇，超聲協(xié)助萃取30min。