[發(fā)明專利]人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子在制備修復(fù)卵巢功能的藥物中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710862854.4
• 申請(qǐng)日: 2017-09-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109528772A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴東梅;張秋婉;郭英;孫俊艷;卜時(shí)夏;王茜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)福利會(huì)國(guó)際和平婦幼保健院
• 主分類號(hào): A61K35/50
• 分類號(hào): A61K35/50;A61P15/08;C12N5/073;C12P21/00
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子在制備修復(fù)卵巢功能的藥物中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子是通過(guò)以下方法制備的：

a)將足月健康產(chǎn)婦新鮮的羊膜組織經(jīng)0.25％胰酶消化1-2min分離出人羊膜上皮細(xì)胞，重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中后置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

b)當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70％-80％時(shí)，使用0.25％胰酶消化貼壁細(xì)胞2-3min并重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，重新調(diào)整細(xì)胞密度為1×10⁵后接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，放置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

c)待細(xì)胞密度再次達(dá)到70％-80％時(shí)，吸出含血清的完全培養(yǎng)基，用PBS緩慢洗滌2-3次后更換無(wú)血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)；

d)14-18小時(shí)后，緩慢地將培養(yǎng)基吸出，在1500-2500g條件下離心20-40min，使用0.2μm的濾器將獲得的培養(yǎng)基進(jìn)行再次過(guò)濾即可獲得人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子是通過(guò)以下方法制備的：

a)將足月健康產(chǎn)婦新鮮的羊膜組織經(jīng)0.25％胰酶消化1.5min分離出人羊膜上皮細(xì)胞，重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中后置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

b)當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70％-80％時(shí)，使用0.25％胰酶消化貼壁細(xì)胞2.5min并重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，重新調(diào)整細(xì)胞密度為1×10⁵后接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，放置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

c)待細(xì)胞密度再次達(dá)到70％-80％時(shí)，吸出含血清的完全培養(yǎng)基，用PBS緩慢洗滌2次后更換無(wú)血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)；

d)15小時(shí)后，緩慢地將培養(yǎng)基吸出，在2000g條件下離心30min，使用0.2μm的濾器將獲得的培養(yǎng)基進(jìn)行再次過(guò)濾即可獲得人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的修復(fù)卵巢功能是指修復(fù)化療損傷卵巢的功能。

5.人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子在制備治療不孕不育癥的藥物中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子是通過(guò)以下方法制備的：

a)將足月健康產(chǎn)婦新鮮的羊膜組織經(jīng)0.25％胰酶消化1-2min分離出人羊膜上皮細(xì)胞，重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中后置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

b)當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70％-80％時(shí)，使用0.25％胰酶消化貼壁細(xì)胞2-3min并重懸于含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，重新調(diào)整細(xì)胞密度為1×10⁵后接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，放置于含有5％CO₂的37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

c)待細(xì)胞密度再次達(dá)到70％-80％時(shí)，吸出含血清的完全培養(yǎng)基，用PBS緩慢洗滌2-3次后更換無(wú)血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)；

d)14-18小時(shí)后，緩慢地將培養(yǎng)基吸出，在1500-2500g條件下離心20-40min，使用0.2μm的濾器將獲得的培養(yǎng)基進(jìn)行再次過(guò)濾即可獲得人羊膜上皮細(xì)胞分泌因子。